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血清ALT活性测定 吴占波、陈旻赉、刘仲春、陈军武 实验目的 生理作用 单位意义 测定方法 临床意义 卡门原理 ALT 丙氨酸+a-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸 NADH+H 乳酸脱氢酶 NAD ++乳酸 1ml血清 340nm波长 1.0cm比色 25 C 1min 光密度下降0.001 实验原理 ALT 丙氨酸+a-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸 [OH] 丙酮酸+2,4二硝基苯肼 丙酮酸2,4二硝基苯腙+H2O 反应30min 在520nm 试剂 ALT底物液 PH=7.4磷酸缓冲液 丙酮酸标准液 2，4-二硝基苯肼溶液 0.4mol/LNaOH 实验操作 1.绘制标准曲线 2.酶活性测定 混匀，放置10分钟，以蒸馏水调零，用520nm波长比色，读取各观密度。各管的光密度An减去0管（A0），以光密度差值（An-A0）为纵坐标，活性单位为横坐标。 酶活性测定：去两只表明测定管T及对照管C,测定前将底物液在37 C水浴中预温5min 混匀，放置10min，用520nm波长比色，读数，用AT-AC差标准曲线，及待测血清中ALT的酶活性 参考值 5~25卡 临床意义 在肝脏疾病时，ALT的浓度会升高，机体各组织都有，肝脏中丙氨酸代谢最旺盛，含量最多发病时活性和含量均升高 注意事项 赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，启活性与吸光度有良好的线性关系，超过时，应将血清稀释测定 A-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼产生苯腙，两种吸光度在520nm出吸光度差异大，空白管的吸光度应不超过0.015 思考题 1终止法 2赖氏与卡门的联系与区别 3标准对照法 4影响准确性较大的试剂 标准对照法 谢谢！ * * 150 97 57 28 0 相当于ALT活性（卡门氏单位） 5 5 5 5 5 0.4mol/LNaOH(ml) 　 　 　 　 　 混匀，置37C水浴20分钟 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 2,4-二硝基苯肼液（ml） 　 　 　 　 　 混匀，置37C水浴预温5分钟 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1M磷酸缓冲溶液PH=7.4(ml) 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 ALT底物试剂（ml） 0.2 0.15 0.1 0.05 0 丙酮酸标准液（ml） 4 3 2 1 0 5 5 0.4mol/LNaOH（ml） 0.1 — 血清（ml） 混匀，置37C水浴中保温20min 0.5 0.5 2,4-二硝基苯肼液（ml） 混匀，置37C水浴中保温30min 0.5 0.5 ALT底物液（ml） — 0.1 血清（ml） 对照管 测定管 CO2 琥珀酸 谷氨酸 a-酮戊二酸 延胡索酸 CO2 柠檬酸 草酰乙酸 酮体 乙酰辅酶A 非必需氨基酸 非必须氨基酸 丙酮酸 脂肪酸 3-磷酸甘油醛 磷酸烯醇式丙酮酸 脂肪 磷酸戊糖途径 磷酸二羟丙酮 甘油 6-磷酸葡萄糖 葡萄糖 5 5 5 5 NaOH溶液(ml) —— —— 0.1 —— 血清（ml） 　 　 　 混匀，37 C,20min 　 0.5 0.5 0.5 0.5 苯肼（ml） 　 　 　 混匀，37 C,30min 　 0.1 0.1 0.1 0.1 PBS(ml) 0.5 0.4 0.4 0.4 ALT底物液（ml） —— —— —— 0.1 血清（ml） —— 0.1 —— —— 标准液（ml） 空白管S 标准管S 对照管C 测定管T