酶工程第三章发酵生产.pptVIP

（1）样品的采集：主要是各种富含所需微生物的土壤、水、气、枯枝烂叶、烂水果等 ； 产酶菌种筛选步骤： 2、筛选 由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选 。 （2）初筛：分离产目的酶的菌株； 给予特殊的培养基或培养条件，进而让目的菌株得以繁殖，尽可能地把只成为目的菌的菌株分离出来。 ?-淀粉酶的筛选 蛋白酶的筛选 （3）复筛：从所得菌株中筛选优良株； 在初筛的基础上，筛选产酶量高、性能更符合生产要求的菌种。 诱变育种 细胞杂交 原生质体融合育种 基因工程育种 （4）高产菌株的选育。 （四）产酶菌种的保存 保藏方法:斜面保藏法,沙土保藏法,真空冷冻干燥保藏法.低温保藏法,石蜡油保藏法等. （五）生产种子的制备 生产种子：由原始保藏菌种，经过活化，扩大培养，用于发酵罐接种的大量菌体。 1、种子制备工艺过程 保藏菌种 活化培养 逐级摇瓶培养 种子罐培养 接种至发酵罐 （1 ）菌种活化 目的：保藏的菌种在用于发酵生产之前，必须接种于新鲜的斜面培养基上，在一定的条件下培养，以恢复细胞的生命活动能力。 方法：在试管斜面上培养1-3代。 （2 ）扩大培养 目的：活化后的菌种经过一级至数级的扩大培养，以获得足够数量的优质细胞。 培养基称为种子培养基。 方法：分为实验室培养和车间培养两个阶段。 扩大培养应注意的事项： （1）尽量减少传代次数，以降低菌种衰退和污染的可能性； （2）培养基成分一般应比发酵培养基的氮源丰富； （3）培养时间一般控制在微生物生长的对数生长期，及时接入下一级培养或发酵罐； （4）严格控制培养条件（pH、温度、通气量等），加强培养过程的实时监测。 三 、培养基 1、碳源：提供碳元素；能源。 碳源、氮源、无机盐、生长因素、水等。 来源：淀粉及其水解物—淀粉水解糖、糖蜜、或含淀粉的原料如大米、薯类、玉米、麸皮、米糠等。 此外石油产品中12碳—16碳的碳氢化合物已成功用作微生物培养基的碳源。 注意：在选择碳源时，应尽量选择对所需酶有诱导作用的碳源，而不使用或少使用有分解代谢物阻遏作用的碳源。 培养基是人工配制的供微生物生长、繁殖及合成酶的营养物质的混合物。 2、氮源：提供氮元素。 来源：①有机氮：常利用农副产品的籽实榨油后的副产品，如豆饼、花生饼、菜子饼等； ②无机氮：含氮的无机化合物，如（NH4）2SO4、NH4NO3 、NaNO3和（NH4）3PO4等。 3、无机盐：大量元素和微量元素。 基本功能：构成细胞的成分； 构成酶产品的组分； 作为酶的激活剂。 4、生长因子 指微生物生长繁殖所必不可缺的微量有机物，主要包括各种氨基酸、嘌呤或嘧啶、维生素等三类物质。 酶制剂中所用的生长因子，大多是由天然原料提供，如玉米浆、麦芽汁、豆芽汁、麸皮、米糠、酵母膏等。 5、水 配制培养基的注意事项： （1）培养基的碳氮比是培养基成分配比的重点； （2）碳源和氮源的选择，要注意避免碳分解代谢阻遏和氮分解代谢阻遏； （3）培养基中无机盐的选择要注意盐类引起的生理酸碱性反应； （4）发酵生产所用的培养基成分配比不可轻易改变。 微生物发酵产酶培养基举例 1、枯草杆菌BF7658 ａ-淀粉酶发酵培养基： 玉米粉 8% 豆饼粉 4% 磷酸氢二钠 0.8% 硫酸铵 0.4% 氯化钙 0.2% 氯化铵 0.15% 自然pH 2、黑曲霉糖化酶发酵培养基 玉米粉 10% 豆饼 4% 麸皮 1% pH 4.4~5.0 （二）培养基的种类 1、斜面培养基： 是供菌种生长繁殖使用的 。 2、种子培养基： 是供菌种生长繁殖使用的 。 3、发酵培养： 是供菌种生长繁殖和发酵产物合成之用。 四、发酵条件的控制—影响产酶的几个重要条件 1、温度的调节控制 （2）有些微生物生长最适温度与发酵产酶的最适温度有所不同。 例： 酱油曲霉生产蛋白酶，28℃时蛋白酶产量比在40 ℃条件下高2~4倍，在20℃条件下发酵，则蛋白酶产量更高，但细胞生长速率较慢。 为此，在有些酶的发酵生产过程中，要在不同的发酵阶段控制不同的温度，即在微生物生长阶段控制在生长的最适温度范围，而在产酶阶段控制在产酶最适温度范围。 （1）不同的微生物有不同的最适生长温度。 （3）