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鸡胚接种与抗原收获 一 鸡胚接种 学习目标：了解胚蛋接种的方法和要求，能 正确接种。 1、接种途径及接种日龄 尿囊腔接种：9~11日龄 绒毛尿囊膜接种：10~12日龄 卵黄囊接种：5~7日龄 羊膜接种：10日龄 静脉接种：12~13日龄 脑内接种：10日龄 （1）尿囊腔接种：取9~11日龄蛋胚，在灯光照射下画气室和接种部位，消毒气室和接种部位，打孔，自接种孔注入接种物，封孔，放入孵化器孵化，不翻蛋。* （2）绒毛尿囊膜接种：取10~12日龄蛋胚，在灯光照射下确定接种孔的位置， 打孔，做人工气室，自接种孔接入接种物，封孔，放入孵 化器孵化，不翻蛋。* 2、手工接种方法 单孔接种：在胚蛋气室的中心位置打一小孔，垂直刺入针头2cm,注入接种物，封孔，放孵化器孵化。 双孔接种：在离气室0.3~0.5cm无大血管处作一标记，作为接种孔的位置， 在气室和标记处各打一个孔，自接种孔注入接种物，封上 两个孔，放入孵化器孵化。 气　室 鸡　胚 卵黄囊 尿囊腔 羊膜腔 绒毛尿囊膜 卵　白 卵膜 尿囊腔鸡胚接种图 尿囊膜接种 羊膜鸡胚接种图 卵黄囊鸡胚接种图 3、蛋胚消毒 常用的消毒方法： 喷雾消毒、表面擦拭消毒脱碘的消毒方法、浸泡消毒法。 喷雾消毒：将消毒剂喷于蛋胚表面的消毒方法。 表面擦拭消毒： 用4%的碘酒擦拭蛋壳接种部位和气室部位，在用75%的酒精脱碘的消毒方法。 浸泡消毒：将胚蛋浸泡在消毒液中的消毒法。 【操作技能】手工接种 常用物品的准备：注射器、锥子、止血钳、碘酒棉、酒精棉、酒精灯、 喷壶、废弃缸、冰袋、种毒，稀释液、白蜡。 操作步骤: 按要求取出适龄的胚蛋，画接种点，进行表面消毒。在胚蛋的接种部位和气室部位打孔，绒毛尿囊膜接种要做人工室。 安装连续注射器，调节使用刻度，排出空气。 在胚蛋的接种部位接种。 将稀释好的种毒放入冰桶中。接种后封孔，双孔的先封接种孔在封气室孔。放入孵化器孵化，调好温湿度，不翻蛋。 注意事项： 做人工气室，胚蛋打孔先打气室孔再打接种孔，接种孔要打破壳膜不能打破尿囊膜。打一定数量的孔要对锥子进行消毒，打孔的顺序从上 往下、从左到右。 接种过程中需校正接种量。 封孔时产生气泡应重新封好。* 二、 抗原的收获 学习目标：了解抗原收获的方法和要求，能正确收获抗原。 1、手工收获方法： 尿囊液的收获、绒毛尿囊膜的收获、胚胎的收获、羊水的收获、卵黄的收获。 尿囊液的收获： 取0~4℃冷却4~24h的胚蛋，碘酒消毒气室部位，打开气室，刺开内壳膜和绒毛尿囊膜，直接无菌吸取尿囊液。 胚胎的收获： 打开气室，撕破内层壳膜和绒毛尿囊膜，挑出胚胎，放灭菌容器中。 绒毛尿囊膜的收获：打开气室，撕去气室部卵膜，观察绒毛尿囊膜的病变，剪取所需的绒毛尿囊膜。 羊水的收获：收获尿囊液后，用无菌的镊子夹起羊膜，用细吸管刺入羊膜腔吸取羊水。 卵黄的收获：打开气室，撕开内壳膜，用镊子夹出卵黄膜，放入灭菌平皿中，也可以将整个卵黄物倒入平皿中，选取卵黄囊。* 2、照胚：接种后的温度一般设置于36.5-37℃，不翻蛋，根据产品的不同选择孵化的时间和照胚的时间，一般2~7天。照胚前要检查孵化器的温度、湿度是否正常。 然后再照胚，照蛋灯从气室部位向下照，死胚发白发亮，血管脱落或血管变细，活胚发红，蛋体布满血管，可见到活动的鸡胚。绒毛尿囊膜接种的鸡胚，绒毛膜上可见明显的斑点。根据产品的要求，留下所要的死胚、活胚，及时取出并做好标记，放入0~4℃冷库，冷却4~24h,准备收获。 3、胚蛋的消毒： 常用的消毒方法： 喷雾消毒、表面擦拭消毒脱碘的消毒方法、浸泡消毒法。 喷雾消毒： 将消毒剂喷于蛋胚表面的消毒方法。 表面擦拭消毒： 用4%的碘酒擦拭蛋壳接种部位和气室部位，在用75%的酒精脱碘的消毒方法。 浸泡消毒： 将胚蛋浸泡在消毒液中的消毒方法。* 【操作技能】手工收获： 常用物品的准备：注射器、真空泵、管道、剪刀、大镊、止血钳、收获瓶、培养基、塞子、留样瓶等。 操作步骤：按要求对胚蛋进行消毒，并移至操作区域。 尿囊液收获：用灭菌的剪刀剪去气室部位，无菌操作连接真空泵、收获管道和收获瓶。开启真空泵，用镊子压住胚体吸