实验一、蛋白质的等电点测定教学内容.pptVIP

实验须知;实验记录;所有固体废弃物如：废纸、固体废弃物、沉淀物等必须弃于垃圾桶中。强酸、强碱必须倒入玻璃器皿中，用水稀释后倒入水槽。 实验室和实验台应保持整洁。公用试剂用毕，立即盖严并还原。实验完毕，仪器洗净放好。 在实验过程中必须遵守操作规程，不得随意乱动乱用。如不会使用，应请教指导教师。凡因乱动乱用违反操作规程而损坏仪器设备，造成事故者，按有关规定进行赔偿和处理。 严禁在实验室内吃饭、吸烟、扔废物和随地吐痰，实验结束离开实验室之前，关好窗户，切断电源，水源，确保安全。;;试剂使用规则;吸量管的使用;吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体。(0.5ml以下的都要吹） 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净，晾干备用。 ;玻璃器皿的一般清洗方法 一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等，先用自来水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自来水反复冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次。干燥备用。 容量分析仪器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自来水冲洗，待晾干后，再用铬酸洗液浸泡数小时，然后用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次，干燥备用。 比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗。洗不净时，用盐酸或适当溶剂冲洗，再用自来水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙布(纸)擦拭。 上述所有玻璃器材洗净(以倒置后器壁不挂水珠为干净的标准)后，根据需要晾干或烘干。 ;实验一、蛋白质的两性性质和等电点测定;一、实验目的;二、实验原理;常用方法：利用溴甲酚绿指示剂的变色来观察蛋白质的两性性质。;当溶液的pH为一定值时，蛋白质极性基团解离的正负离子数相等，净电荷为0，此溶液的pH值为该蛋白质的等电点。 不同蛋白质具有各自特定的等电点，与该??白质的组成结构有关。 在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用性质的变化测定各种蛋白质的等电点。 常用方法：观察蛋白溶液在不同pH值下的溶解度。;本实验通过观察不同pH溶液中酪蛋白的溶解度来测定其等电点。 用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。向各缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。;三、试剂仪器和试剂;0.5% 酪蛋白溶液 0.01%溴甲基酚绿指示剂 0.10 mol/L 盐酸溶液 0.10 mol/L 氢氧化钠溶液 1.00 mol/L 醋酸溶液 0.10 mol/L 醋酸溶液 0.01 mol/L 醋酸溶液 ;四、实验步骤与结果;（2）观察其混浊度。静置15分钟后，再观察其混浊度。结果可用“+、++、+++”表示浑浊度，最混浊的一管pH即接近酪蛋白的等电点。;实验结果： 按照实验报告要求计算实验结果。 分析： 通过操作本次实验，探讨影响本实验结果的主要影响因素。 分析实验成功或失败的主要原因。 ;六、实验结论;1、书上p202，三道思考题？ 2、蛋白质沉淀测定常用的方法有哪些？