高效液相色谱-魏芸.ppt

液相色谱基础知识 二、定义 色谱法(Chromatography)：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术。 色谱法的分离原理 色谱发展史 液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用 一、液-固吸附色谱 （一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）吸附剂和流动相的选择 （一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离 （二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 1. 硅胶 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分越后出柱 （三）吸附剂和流动相的选择： 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸，醇 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性： 流动相极性↑大，对被测组分的洗脱能力↑大 “相似相溶”原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性， 选择适当极性的流动相 4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 二、薄层色谱法 （一）概述 （二）定性参数 （三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备 （六）定性与定量分析 （一）概述 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、纯度测定 L0 （二）定性参数 1. 比移值Rf 1）K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳） 2. 相对比移值Rs 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可为样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 （三）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂 （四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择） 根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性 （六）定性与定量分析 定性分析——日光，紫外光，显色 定量分析——洗脱法，薄层扫描法 三、纸色谱法 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、 定性、和定量的液-液分配色谱法 固定相：纸纤维吸附的水 流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇） 分离机制：同液-液分配色谱 定性参数： Rf GC与HPLC比较 高效液相色谱的固定相和流动相 （－）固定相 高效液相色谱固定相依据承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬