植物细胞工程实验修改版.doc

植物细胞工程 实验一 培养基母液的制备 一、实验目的与意义 学习和掌握培养基母液的配制方法。 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。 二、实验器材 电子天平（称量为0.0001g）、电子天平（称量为0.01g）、烧杯（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000ml、100 ml、50 ml、25 ml）、细口瓶（1000 ml、100 ml、50 ml、25 ml）、药勺、玻璃棒、电炉。 三、实验药品 NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、 H3BO3、 MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、 Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸。 四、实验步骤 每种母液均配制500ml，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制 表1 MS培养基大量元素母液制备 序号 药品名称 培养基浓度（mg/L） 扩大20称量(mg) 备注 1 NH4NO3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml 2 KNO3 1900 19000 3 CaCl2·2H2O 440 4400 4 MgSO4·7H2O 370 3700 5 KH2PO4 170 1700 各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到500ml的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液50ml。 注意： ①配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的双蒸水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量双蒸水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。 ②CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。 ２、微量元素母液的配制 MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe ）组成。微量元素用量较少，特别是CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O。按照表2配方，用称感量为0.0001g的电子天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1 L培养基，取微量母液5ml。 表2 MS培养基微量元素母液的配制 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大200倍称量(mg) 1 MnSO4·4H2O 22.3 2230 2 ZnSO4·7H2O 8.6 860 3 H3BO3 6.2 620 4 KI 0.84 84 5 Na2MoO4·2H2O 0.25 25 6 CuSO4·5H2O 0.025 2.5 7 CoCl2·6H2O 0.025 2.5 注意： 使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。 3、铁盐母液的配制 铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解。配制培养基时，配制1L取此液5ml。 表3 MS铁盐母液的配制 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大200倍称量(mg) 1 Na2-EDTA? 37.3 3730 2 FeSO4·7H2O? 27.8 2780 注意： 在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成Fe S 04和Na2EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，Fe S 04会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，Fe S 04和Na2EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。 4、有机母液的配制 MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，注意称量时用电子天平。 注意： 由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤