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第二章 基因克隆的载体 引 言（introduction） 第一节 质粒载体（plasimid vectors） 第二节 噬菌体载体（phage vectors） 第二章 基因克隆的载体 引 言（introduction） 第一节 质粒载体（plasmid vectors） 第二节 噬菌体载体（phage vectors） 质粒载体的生物学特征 （1）质粒是一种广泛存在于细菌细胞中染色体以外的能自主的 复制的裸露的环状双链DNA分子，比病毒更简单。在霉菌、蓝藻、 酵母和一些动植物细胞中也发现了质粒，目前对细菌的质粒研究得 比较深入，特别是大肠杆菌的质粒。 （2）质粒的大小差异很大，最小的只有1kb,只能编码中等大 小的2-3种蛋白质分子，最大的达到200kb。质粒的拷贝数多则50， 少则只有一个。 （3）质粒的不亲和性，两种亲缘关系密切的不同质粒不能在同一宿主细胞中稳定共存，属于同一个不亲和群，如pMB1或ColE1的派生质粒。已鉴别出25个以上大肠杆菌质粒的不亲和群，它们是不相容群体的。 （4）质粒的分类 F质粒，或叫致育质粒，仅携带转移基因，特征：促进质粒间的有性结合。 R质粒，或叫耐药性质粒，能赋予宿主细胞耐药性，特征：耐药性。 Ti质粒,根瘤农杆菌中的毒性质粒，赋予宿主细胞致病性。 Col 质粒， 降解质粒， 质粒载体的生物学特征 （5）质粒的存在形式 有超螺旋、开环双螺旋和线状双螺旋三种。在琼脂糖凝胶电泳中，不同构型的同一种质粒DNA，尽管分子量相同，仍具有不同的电泳迁移率。其中走在最前面的是SC DNA，其后依次是L DNA和OC DNA。 双螺旋共价闭合环（超螺旋SC构型） 开环双螺旋（一个裂口， OC构型） 线状双螺旋（两个裂口，L构型） 质粒载体的生物学特征 （1）pUC 是在pBR322基础上发展起来的克隆载体。大小为2.7 kb，带有复制起始位点，ampicillin 抗性基因和lacZ 基因。 常用质粒载体介绍 （2）pGEM-3Z 带有 LacZ 基因，大小为2.9 kb ， 氨苄青霉素抗性基因，高拷贝。 （3）pBluescript SK pBluescript SK 同 pGEM 类 似，另外还带有线状噬菌体f1 的复制起始位点。 可以产 生单链DNA。 第二章 基因克隆的载体 引 言（introduction） 第一节 质粒载体（plasimid vectors） 第二节 噬菌体载体（phage vectors） 第二节 噬菌体载体 一、?噬菌体 1 ?噬菌体的生物学特征 2 ?噬菌体的侵染 3 ?噬菌体的DNA分子 二、M13噬菌体 ?噬菌体的生物学特性 ?噬菌体由正二十面体的蛋白质头部和中空管状的蛋白质尾部组成。头部包含线状染色体DNA，侵染寄主时将自己的DNA注入寄主细菌。 ?噬菌体属温和噬菌体。 ?噬菌体的生物学特性 　　The ? Phage consist of a linear chromosome enclosed in a protein coat (capsid,衣壳 ). When the phage infecting the host cells, it injects its DNA into the host bacterium. ?噬菌体的侵染 ?噬菌体的侵染是溶源侵染，是噬菌体DNA分子在宿主细胞中能够稳定存在，许多噬菌体DNA能整合到寄主细胞染色体上并可以随着寄主细胞的分裂而进行复制。 在溶源性细菌内存在的整合或非整合的噬菌体DNA被称为原噬菌体（prophage ）。而携带了原噬菌体的细菌被称为溶源菌（lysogen ） 。 ? 噬 菌 体 的 侵 染 ?噬菌体的侵染过程 Lysogenic cycle (溶源周期)：Under certain circumstances, however, the lambda DNA inserts itself into the E. coli chromosome and is a stable part of the chromosome. The Lambda DNA is replicated along With　the E.coli chromosome. If the host cell becomes damaged, such as UV treatment, the prophage DNA excises itself and undergoes lytic growth. ?噬菌体的DN