流感病毒实验室检测.pptVIP

成为参比中心4年内，所有流感网络实验室均具备病毒分离能力，并上送毒株 省参比中心的毒株复核鉴定工作 各实验室毒株在网上送检时需要多点一下送省里 毒株 国家流感中心 省CDC 10个工作日内完成复核鉴定 滴度≥8的型别鉴定，滴度8核酸鉴定，每周一在系统中反馈结果 * 考核标本制备： 14份H1N1，14份H3N2，14份 BV， 10份H5N1，7份H7N9，10份阴性 7份BY和H3N2混合型 4份H1N1，H3N2，BY混合型 每个地市随机抽取5份标本 * 增加混合型 B型要求分系 考虑到运输问题，均为强阳性 * 14家网络实验室结果全部正确 一些问题： 原始记录应为手写，而非全部打印+签名 原始记录空白项、涂改项 有一地市为非正式的报告单，报告人未签名，报告处未盖章 * 祝各位代表 工作顺利、生活愉快！ * * 接种病毒 * 国家流感中心定期组织对各流感监测网络成员单位进行新技术培训，重点加强未成为省级流感参比中心的省级疾病预防控制中心监测技术的培训。省级疾病预防控制中心每年组织对本省（区、市）的专业技术人员的培训，重点加强不具备病毒分离能力网络实验室的培训。 各网络实验室可选派专业技术人员至省级疾病预防控制中心或国家流感中心进修。 根据流感监测工作要求，国家流感中心和省级疾病预防控制中心可派出专家对部分网络实验室所在疾病预防控制中心技术人员进行现场示范和指导。 * 国家流感中心定期组织对各流感监测网络成员单位进行新技术培训，重点加强未成为省级流感参比中心的省级疾病预防控制中心监测技术的培训。省级疾病预防控制中心每年组织对本省（区、市）的专业技术人员的培训，重点加强不具备病毒分离能力网络实验室的培训。 各网络实验室可选派专业技术人员至省级疾病预防控制中心或国家流感中心进修。 根据流感监测工作要求，国家流感中心和省级疾病预防控制中心可派出专家对部分网络实验室所在疾病预防控制中心技术人员进行现场示范和指导。 * CPE出现时间与感染病毒的型别、毒株的差异、感染量的大小和MDCK细胞的敏感性有关 每日观察细胞病变(CPE) 标本接种后7天还未出现CPE，维持液经HA试验阴性者，继续盲传1～2代后，HA试验仍为阴性者，则MDCK细胞病毒分离为阴性，标本可弃去 * * 标本接种于9日龄鸡胚 33℃～35℃培养72小时 检卵 标本准备 * * 1)????? 9～11日龄鸡胚 2)????? 照蛋灯 3)????? 70%～75％酒精 4)????? 1ml 一次性注射器 5)????? 鸡蛋开孔器 6)????? 无菌胶布或蜡 7)????? 10ml 试管和试管架 8)????? 10ml 移液管或1ml移液器及无菌吸尖 9)????? 无菌镊子 10) 无菌眼科剪 * ■ 检视标记鸡胚 ◆ 用照蛋灯检视鸡胚，判断鸡胚状态 血管：活胚血管清晰；死胚模糊，成淤血带或淤血块 胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动 绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊 膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限 ◆ 标记出鸡胚的气室与尿囊的界限、胚胎头部的位置 ◆ 如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉 * ■ 接种病毒方法 ◆ 单腔接种 盲种 ◆双腔接种 灯下接种 开窗接种 鸡胚分离方法 * ◆将标记好的鸡胚的气室朝上放置在蛋盘上，通常每个样本接种3个鸡胚 ◆用70%～75％酒精消毒鸡胚，在气室端钻孔，开10x6mm窗口 ◆用注射器吸200μl处理过的临床标本，装上16 号针头 ◆从窗口中滴入无菌的液体石蜡，然后轻轻晃动鸡胚，让液体石蜡在鸡胚壳膜内层铺开，此时在照蛋灯下即 可清楚的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺入胚胎的 鄂下胸前，用针头轻轻拨动下颚及腿，当进入羊膜腔时，能看到鸡胚随着针头的拨动而动，即可注射100μl标本。将针头退出至? 寸，将另外100 μl标本 注入鸡胚尿囊腔 * ◆用同一注射器和针头将同一标本依上法接种另外的两枚鸡胚 ◆将针头弃于合适的生物安全装置中 ◆用消毒过的医用胶布封口 ◆ 33～35oC 温箱培养鸡胚2～3 天。临床采样标本通常培养3天，病毒传代通常培养2天 鸡胚进行病毒分离培养时，每天检查鸡胚生长情况，24小时内死亡的鸡胚，认为是非特异死亡应弃去 * ■收获尿囊液和羊水 ■鸡胚在收获前应4℃过夜或至少放置4小时 ■标记15ml 无菌塑料管与相应的鸡胚编号一致 ■用70%～75％酒精消毒鸡胚顶部 ■用无菌镊