酶工程第一篇主要内容.docVIP

第一章 绪论 （A） 一、酶(enzyme)是由生物体产生的具有催化功能的生物大分子。 分类：蛋白类酶、核酸类酶 二、酶工程：酶的生产与应用的技术过程 三、酶工程的主要任务：经过预先设计，通过人工操作, 获得人们所需的酶，并通过各种方法使酶充分发挥其催化功能。 三、酶工程的主要内容包括：酶的生产；酶的提取与分离纯化；酶分子修饰；酶固定化；酶的非水相催化；酶分子定向进化；酶反应器和酶的应用 四、酶发展史 1878年,库尼Kunne首次将酵母中进行乙醇发酵的物质称为酶(enzyme),该词源于希腊文,意为”在酵母中”。 1926年,萨姆纳Sumner首次从刀豆中分离纯化出脲酶结晶,证明其有蛋白质性质. 1971年，在美国举行了第一届国际酶工程学术会议，会议的主题是固定化酶。 1982年，切克Cech等人发现RNA也具有催化活性。1983年,阿尔特曼Altman等人发现核糖核酸酶P的RNA部分具有该整体酶的催化活性,而该酶的蛋白质部分无催化活性。Cech和Altman因发现RNA具有催化活性而共同获得1989年诺贝尔化学奖. 第二节 酶的命名和分类 一、蛋白类酶的分类与命名 （一）推荐名（习惯命名） 通式：底物的名称＋催化反应的类型＋“酶”字 说明：对于水解酶类，其催化的为水解反应，在命名时可省去说明反应类型的“水解”字样，只在底物名称之后加上酶。 （二）系统命名 通式：酶作用底物＋酶作用基团＋催化反应类型＋“酶”字 酶分类：1、氧化还原酶类 、2、转移酶类、3、水解酶类、4、裂合酶类、5、异构酶类、6、合成酶类 （三）蛋白类酶（P酶）的分类原则为： 1、按照酶催化作用的类型，将蛋白酶分为6大类，分别为氧化还原酶类 、转移酶类、水解酶类、裂合酶类、异构酶类、合成酶类。 2、每个大类中，按照酶催化作用的底物、化学键或基团的不同，分为若干亚类。 3、每一亚类中再分为若干小类。 4、每一小类中包含若干个具体的酶根据系统命名法，每一种具体的酶，除了有一个系统名称以外，还有一个系统编号（四码编号）。 二、核酸类酶（R酶）的分类与命名 （一）分类：分子内催化R酶：催化本身RNA分子进行反应的R酶。 分子间催化R酶：催化其他分子进行反应的核酸类酶。 1、分子内催化R酶 （1）自我剪切酶：在一定条件下催化本身RNA分子进行剪切反应的R酶 (2)自我剪接酶：在一定条件下催化本身RNA分子同时进行剪切和连接反应的R酶。 根据结构特点和催化特性的不同，分为两类 ①含Ⅰ型IVS的R酶 与四膜虫rRNA前体的IVS结构类似，自我剪接时需要Mg2+、鸟苷或5’ ②含Ⅱ型IVS的R酶 与细胞核mRNA前体的IVS结构类似，需Mg2+参与。 2、分子间催化R酶 催化其他分子进行反应的核酸类酶。 根据作用底物分子不同，分为 RNA剪切酶：催化其他RNA分子进行剪切反应的核酸类酶。 DNA剪切酶：催化其他DNA分子进行剪切反应的核酸类酶。 多肽剪切酶：催化多肽分子剪接作用的核酸类酶。 多糖剪切酶：催化多糖分子剪切和连接接作用的核酸类酶。 多功能酶：催化其他分子进行多种反应的核酸类酶。如：L19-IVS 第三节 酶的活力测定 一、酶活力：指在一定条件下，酶所催化的反应初速率。 二、酶活力测定方法：化学测定法、光学测定法、气体测定法 三、酶活力测定的一般步骤： A：根据酶的专一性，选择适宜的底物，并配成一定浓度的底物溶液。 B：确定反应的温度、pH值等条件。 C：在一定条件下，将酶液与底物混匀，适时记下反应开始的时间。 D：反应到一定时间，取出适量反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减少量。 注意：若不能即时测出结果，需要及时终止反应，然后再测定。 E：采用光学检测法、化学检测法等生化监测技术，测定反应液中物质的变化量。 终止酶反应的方法：P9页 （1-4） 四、酶活力单位：1961年国际生化学会（IUB）酶学委员会建议使用统一的国际单位。 ①酶的国际单位定义：在实验室规定的条件下，每分钟催化lumol底物转化为产物的酶量为一个酶活力国际单位(用“IU”表示，简写为U)。 ②卡特（Kat）:在特定条件下，每秒催化1mol底物转化为产物的酶量定义为1Kat。 IU与Kat之间的换算：1Kat=6×107IU ③习惯单位：比活力 酶的比活力：指在特定的条件下，单位质量（mg）酶蛋白（或RNA）所具有的酶活力单位数。 酶比活力＝酶活力（单位）/mg酶蛋白（或RNA） 同种酶制剂，比活力可以反应酶的纯度和活力的高低。 酶的生产 酶的生产：通过各种方法获得所需酶的技术过程。 酶的生产方法可以分为：提取分离法、生物合成法、化学合成法。其中提取法是最早采用的而沿用至今的方法，生物合成法是五十年代以来酶生产的主要方法，而化学合成法仍在实验室阶段。 第二章 酶