显微镜技术基本原理讲解学习.ppt

显微镜技术和显微镜;掌握常用显微镜的结构及性能特点;第一节 光 学 显 微 镜;一、光学显微镜的工作原理;光学显微镜的工作原理图; ① 机械部分：镜座、镜柱、镜臂、镜筒、调焦装置、载物台（物镜转换器） ② 光学部分：目镜、物镜、反光镜、聚光镜 放大倍数： 目镜的放大倍数×物镜的放大倍数;三、光学显微镜的性能参数;(一) 放 大 率;(二) 数 值 孔 径;NA=nsinβ ;分辨率：显微镜的最重要参数，能够区分开两个质点的最小距离。 ;提高显微镜分辨率的方法;(四) 视 野;(五) 景 深 与 焦 长;(六) 镜 像 亮 度 和 清 晰 度;(七) 工 作 距 离;四、像 差 和 色 差;(一)、像 差 (aberration);1．球 差 ( spheric aberration ) ;2．彗 差 (broom aberration);透 镜 的 彗 差;3．像 散 (astigmatism) ;透 镜 的 像 散;4．场 曲 ;5．畸 变 (distortion) ;透 镜 的 畸 变;(二)、 色 差;透镜的轴向色差（Ａ）和垂轴色差（Ｂ）;五、光学显微镜的不足之处;第二节 光学显微镜的分类及其应用;一、双 目 生 物 显 微 镜;目镜;二、荧 光 显 微 镜;荧光（Fluorescence）： 细胞中的某些物质（如叶绿素）经紫外线照射后能发出可见光线，称为荧光。 自发荧光：由细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光。 诱发荧光：一些细胞成分本身经紫外线照射后不发荧光，但用荧光染料（酸性品红、甲基绿、吖叮橙等荧光色素）进行活体染色或固定后切片染色，就能在荧光镜下看见荧光，这种荧光叫诱发荧光。;荧 光 显 微 镜 的 种 类;荧 光 显 微 镜 的 主 要 部 件;吸收滤色镜;落 射 荧 光 显 微 镜 的 构 造; 目镜;落 射 荧 光 显 微 镜 原 理;三、相 衬 显 微 镜; 相衬显微镜比普通光学显微镜多了2个部件： 在聚光器上增加一个环形光阑； 在物镜后焦面增加一个相板，相板上有一个环形区，通过环形区的光比从其它区域透过的光超前或滞后1/4λ，这样就使通过标本不同区域光波的相位差转变为振幅差。;相衬显微镜照明原理; 光通过标本致密区时发生衍射，产生偏折光，相位和未受影响的直射光相比被推迟了1/4λ。只有未发生偏折的的直射光可通过相位板的环形区，其它的偏折??在物镜的后焦面上产生了一个与通过相位板的环形区的光不同的1/4λ的光程差。两组光在平面上成像。; 如相板的环形区使直射光超前1/4λ，加上开始直射光超前的1/4λ，直射光共超前1/2 λ，直射光和偏折光叠加形成的合成波振幅减少，产生暗反差。 如相板的环形区使直射光滞后1/4λ，加上开始直射光超前的1/4λ，两者相抵直射光不发生变化，直射光和偏折光无相位变化，形成的合成波振幅增加，产生明反差。;四、倒 置 显 微 镜;倒置显微镜;五、暗 场 显 微 镜;暗视野照明方式 ;六、紫 外 光 显 微 镜;七、偏 光 显 微 镜 ; 偏光显微镜是在一般显微镜的基础上增添了使普通光转变成线偏振光和检测偏振光的装置或观察干涉图样的特殊透镜。即光源前有偏振片（起偏器），使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中有检偏器（一个偏振方向与起偏器垂直的起偏器）。; 偏光显微镜的载物台是可以旋转的。当载物台无样品时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线。而放入旋光性物质后，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。;偏光显微镜的结构;激光扫描共聚焦显微镜原理图;激光扫描共聚焦显微镜实物图;1. 激光扫描共聚焦显微镜工作原理;1. 激光扫描共聚焦显微镜工作原理; 在显微镜载物台上加一个微量步进马达，使载物台上下移动，改变焦平面，不同层次的光切面图像经计算机图像三维重组，就能获得样品的立体结构图像。;2. 激光扫描共聚焦显微镜的基本结构;1.抑制图像的模糊，获得清晰的图像 2. 具有更高的轴向分辨率，并可获取连续光学切片 3. 增加侧向分辨率 4. 由于点对点扫描去除了杂散光的影响;4. CLSM在医学检验中的应用;九、干涉相衬显微镜（interference contrast microscope）; 在物镜的后焦面处安装了第二个Wollaston棱镜(滑行器)，把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面（x和y）仍然存在。