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生化工艺理论课复习提纲 第一章 绪论 1.生物技术产品的特点 （1）生物活性－结构复杂 （2）分布广泛－胞内胞外 （3）原始浓度偏低 （4）组分复杂 （5）产物稳定性差 批间差异大 （6）质量要求高（生物医药） （7）经济性 2.生物分离纯化技术的特点 （1）环境复杂、分离纯化困难 （2）含量低、工艺复杂 （3）稳定性差、操作要求严格 （4）目标产物最终的质量要求很高 （5）终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同 （6）操作条件（环境）严格、无菌或密封 3.生物分离纯化技术选择依据 目标产物与杂志之间的生物学和物理化学性质上的差异 4.以发酵液为例，生物分离纯化的一般工艺流程 第二章 发酵液的预处理 1.发酵液预处理目的 （1）改变料液性质,促进固液分离，提高分离效率 （2）除去部分杂质(杂蛋白和不溶性的多糖等），以利后续操作 （3）尽可能使产物转移到后处理的相(液）中，利于提取和精制的顺利进行。 2.常见发酵液预处理方法 ①过滤特性的改善 a、加热（降低黏度、去除杂蛋白） b、pH、稀释 c、凝聚与絮凝（增大粒度） d、加助滤剂（改善过滤） ②杂质的去除 a、去杂蛋白（等电点、变性剂、吸附） b、去多糖（酶解） c、去离子（沉淀） 3.凝聚、絮凝与盐析 联系： 絮凝、凝聚和盐析都是使蛋白质等胶体从溶 液中析出的方法，但其原理和方法有所不同。 区别： 絮凝是指通过聚电解质的架桥作用，将溶液中的蛋白质连接起来，增大蛋 白质的尺度而不是蛋白沉淀。 凝聚和盐析虽然都是采用无机盐使蛋白质沉淀，但凝聚所用的是含有高价离子的无机盐，主要是由于蛋白质与带相反电荷的高价离子发生电荷中和作用而使得蛋白质聚集沉淀，所以凝聚所需的盐浓度很低。而盐析使用的是中性盐，主要依靠盐离子的亲水性，夺走与蛋白质亲和的水而沉淀，因而盐析通常需要较高的盐浓度。 4.助滤剂-定义、原理 （1）定义： 助滤剂是一种质地坚硬、颗粒均匀，不可压缩的，具有吸附胶体能力的惰性物质。 （2）原理： 助滤剂具有吸附胶体能力，可以改变滤饼的结构（使其成网状），降低滤饼的可 压缩性（可压缩变成部分可压缩），从而降低过滤的阻力，加快过滤速度。 5.改善过滤的方法 a. 降低黏度：加水稀释和加热 b. 调整pH c、加入反应剂 d、加入助滤剂 e、增大悬浮颗粒体积 f、操作条件的改变 6. 错流过滤（定义）：悬浮液在过滤介质表面做切向流动，利用流动的剪切作用将过滤介质表面的固体带走的方 1.细胞破碎的定义、方法有哪些？ 定义：用物理、化学、酶或机械的方法破坏细胞壁或细胞膜。 方法： （1）机械破碎： 高压匀浆法、珠磨法、超声波破碎法、X-press法 （2）非机械破碎：酶溶法、化学试剂法、渗透压冲击法、反复冻融法、干燥法 2.高速球磨与高压匀浆的影响因素 高速球磨：⑴搅拌速度 －适中 a. 破碎速率与外缘速度成正比（一定范围） b.外缘速度增加，热量与消耗的功率增加，产物失活率增加 ⑵细胞浓度－最佳 ⑶珠粒的大小、用量 a.珠粒越小，细胞破碎速度越快（太小，易于漂浮）－0.2mm。 b.用量越多，细胞破碎速度越快（80－90％填充密度） ⑷T－5-40℃ ⑸流量－小 (6)微生物 高压匀浆：a. T b.操作压力 3.细胞破碎方法的选择依据 (1) 目标生化物质的位置： (2) 目标生化物质对破碎条件的敏感性： (3) 破碎程度、目的 (4) 规模、经济 4.各破碎方法的原理及应用 5.包涵体（定义） 细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒 第三章 固相析出分离技术 1.可逆沉淀与不可逆沉淀 可逆沉淀：等电点沉淀、盐析法、有机溶剂沉淀； 不可逆沉淀：热变性沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀 2.盐析-定义、原理及影响因素 盐析：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质 在水溶液中的溶解度随盐浓度的升高会急剧下降，并产生沉淀， 这种现象称为盐析。 盐析原理a.盐亲水性大于pr亲水性－破坏水化模 b.盐离子中和pr分子表面电荷，静电斥力减弱。 影响因素： 盐饱和度的影响、样品浓度的影响、ph的影响、温度的影响 影响因素： (1)溶质种类的影响： (2)溶质浓度的影响： 蛋白质浓度大，盐的用量小，共沉作用明显，分辨率低； 蛋白质浓度小，盐的用量大，共沉作用小、分辨率高 (3)pH值：影响蛋白质表面净电荷的数量 通常调整体系pH值使其在pI附近；且pr稳定性好 (4)盐析温度-常温 一般在高盐浓度下，