杀菌率试验规程.docVIP

Q/KM—ZJ— —2008 液体洗涤剂杀菌试验规程 （内部使用） 2008年 月 日内部执行 质量管理中心实验室 引用标准 GB15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 QB/T2738-2005 日化产品抗菌抑菌效果的评价方法 QB/T2850-2007 抗菌抑菌型洗涤剂 4、 2002年版 《消毒技术规范》 (中华人民共和国卫生部) 5、2001年版 《药品微生物学检验手册》 （科技出版社） 杀菌率试验规程 1、试验菌、试验温度、作用时间、试液浓度 试验菌种：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），大肠杆菌（8099或ATCC 25922），白色念珠菌。 试验温度：20℃±1℃。 作用时间：最短不得小于30s。常规作用时间为2min、5min、10min、20min。 试液浓度：中和剂鉴定用试液浓度应为正式杀菌试验最高浓度。 菌悬液用量：正式杀菌试验用菌悬液的浓度、取量应与中和剂鉴定中1组、2组所用菌悬液的浓度、取量相同。 2、细菌繁殖体悬液、菌片的制备程序： 2.1菌悬液的制备 ⑴ 取冻干菌种管，在无菌操作下，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吸吹数次，使菌种融化分散。取含5.0ml-10.0ml营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置37℃培养18h～24h。用接种环取第1代培养的菌悬液，划线于营养琼脂培养基平板上，于37℃培养18h～24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于37℃培养18h～24h，即为第3代培养物（放在4℃左右冰箱中保藏。每隔2-3个月移种一次，继续保藏。）。 ⑵ 取第3代～14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（经18h～24h培养），用5.0ml吸管吸取3.0ml-5.0ml稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0ml吸管将洗液移至另一无菌试管中，在手掌上振敲80次（力度适中，勿溅出），以使细菌悬液均匀。或从新鲜菌种斜面沾取少量菌苔，接种在适合试验菌生长的培养基中，37℃培养18h～24h（或适宜时间）。作为原菌液。（源于《药品微生物学检验手册》211页） ⑶ 细菌繁殖体悬液应保存在4℃冰箱备用。尽量减少在室温下放置时间，以减少细菌的自然死亡。应当天使用不得过夜。 回收菌数为1×104～9×104 cfu/ml 用PBS液配置 GB15979-2002 《一次性使用卫生用品卫生标准》 回收菌数为1×108—5×108cfu/ml用TSB营养肉汤配置—2002 《消毒技术规范》 2.2、菌片的制备程序：《消毒技术规范》 ⑴ 取冻干菌种管，在无菌操作下，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吸吹数次，使菌种融化分散。取含5.0ml-10.0ml营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置37℃培养18h～24h。用接种环取第1代培养的菌悬液，划线于营养琼脂培养基平板上，于37℃培养18h～24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于37℃培养18h～24h，即为第3代培养物。 ⑵ 取第3代～14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（经18h～24h培养），用5.0ml吸管吸取3.0ml-5.0mlTSB营养肉汤加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0ml吸管将洗液移至另一无菌试管中，在手掌上振敲80次，以使细菌悬液均匀，含菌量1×108—5×108cfu/ml。 ⑶用无菌镊子夹住已灭菌10mm*10mm滤纸一角，一面朝上，注入10ul菌悬液，放到无菌平板内，37℃温箱中干燥20min-30min，（或在室温自然阴干后使用）制成菌片。每个菌片回收菌落，按活菌培养计数所得结果，应为5×105—5×106cfu/片。） ⑷细菌繁殖体悬液和菌片，用毕应随时保存在4℃冰箱内。尽量减少在室温下放置时间，以减少细菌的自然死亡。（应当天使用不得过夜。） 3、操作程序 3.1、悬液定量法杀菌试验操作程序 样品用无菌标准硬水稀释至同中和剂鉴定用试液浓度，或低于中和剂鉴定用试液浓度，制成（稀释液）试验样液。 将试管按需要数量分别排列于试管架上，各组由左向右，排序、标记。 配制菌悬液，浓度为1×104～9×104 cfu/ml—GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》或1×108—5×108cfu/ml—2002 《消毒技术规范》 取杀菌试验用无菌大试管，先加入0.5ml试验用菌悬液，再加入0.5ml有机干扰物质，混匀，置20±1℃ 5min，用无菌吸管吸取步骤1中的试