GMP管理文件-控制菌检查方法验证操作规程.docVIP

GMP管理文件 题 目 控制菌检查方法验证操作规程 编码： 页序/ 总页 1/1 制 定 审 核 批 准 制订日期 审核日期 批准日期 颁发部门 质量部 生效日期 分发部门 化验室 目的：为使控制菌检查的操作规范化、制度化，故建立此规程 适用范围：控制菌检查必须按本规程执行。 三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。 四、正文： 1、 控制菌检查方法适应性试验 1、1 供试液的制备 取样品10g，用胰酪大豆胨液体培养基（TSB），作为稀释液制成1：10供试液，混匀，在20～25℃培养 ,培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖（约2小时）。 1.2 试验菌 大肠埃希菌和铜绿假单胞菌 1.3适用性试验 取相当于1mL供试品的上述预培养物及不大于100cfu的大肠埃希菌和铜绿假单胞菌分别接种至适宜体积肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18小时。应能分别检出所加大肠埃希菌和铜绿假单胞菌相应的反应特征. 1.4结果判断? 上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方法进行供试品检查；若未检出试验菌，应消除供试品的抑菌活性，并重新进行 山GMP管理文件 题 目 控制菌检查方法验证操作规程 编码： 页序/总页：2/2 方法适用性试验。 1.5耐胆盐革兰氏阴性菌的检查 供试液的制备和预培养：取样品10g，用胰酪大豆胨肉汤琼培养基（TSB），作为稀释液制成1：10供试液，混匀，在20～25℃培养 ,培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖（约2小时） 1.5.1定性试验： 除另有规定外，取相当于1g或ml供试品的预培养物接种至适应体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液培养基中，30～35℃培养24～48小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，30～35℃ 培养18～24小时。 判断结果：如果平板上无菌生长，判供试品未检出耐胆盐革兰氏阴性菌。 1.5.2定量检查： 选择和分离培养：取相当于0.1g、0.01g和0.001g（或0.1ml、0.01、0.001ml）供试品的预培养物或其稀释剂分别接种至适应体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时后，上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，30～35℃ 培养18～24小时。 判断结果：若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴性。