REACH法规-第五卷译稿-3.docVIP

C.2. 水蚤急性中毒 1. 方法 引言 本测试方法用于导致淡水水蚤 静止的化学物质的中级有效浓度（EC50）的测定。因此有必要尽可能掌握这些物质的水溶性、蒸汽压、化学稳定性、溶解常数和生物降解率等数据。 在设计测定方法和分析结果时还应考虑到其它信息（例如结构式，纯度，主要杂质的种类和百分比，添加物的存在和数量和正辛醇/水分配系数）。 定义和单位 水蚤的LC50的浓度的直接测定是通过如实验方法所述的EC50的测定来实现的。 本实验中的（导致水蚤）急性中毒的毒性是指导致（水蚤）静止的中级有效浓度（EC50），这个浓度按照原始数据值，表示在给定时间内接触该浓度的物质导致50％数量的测定水蚤静止。 静止： 动物在轻轻敲打实验容器后15秒内仍不能游动被认为已经处于静止状态。 所有测定物质的浓度用重量体积比表示（mg/L）。也可以用重量比（mg/kg）表示。 参考物质 可以作为测定的参考物质指的是在实验室测定条件下，测定物的响应信号没有显著变化的物质。 用四种不同物质作EEC环形实验的结果总结在附录2中。 测定方法原理 极限测试需用100毫克每升进行测定从而保证EC50值大于此测定浓度。 将水蚤48小时置于一系列含有不同浓度的被测物质的水中，如做时间较短的实验，在实验报告中要指明修改部分。 除非在其他特定的实验条件下，以及足够的一系列不同的被测物质浓度，被测物质的不同浓度会对水蚤的游动能力造成不同平均程度的影响。在实验最后，不同的浓度会造成不同百分比的水蚤不再游动。导致0%或者100%水蚤静止的浓度直接来自实验的观察结果，而48小时的EC50值来自可能的计算。 这个实验使用一种统计系统，所以实验方法在水蚤与被测物质的接触过程中不能更新。 定量标准 定量标准适用于极限测试和整个测定方法和过程。 实验最后，对照实验的静止程度不能超过10%。 对照实验下的水蚤，不能被困在水面表层。 在整个实验过程中，实验容器中的溶解氧浓度必须始终保持在3mg/L以上，而且无论如何不能让溶解氧浓度低于3mg/L。 在整个实验持续过程中，被测物质的浓度必须保持在原浓度的80%以内。 对于那些易溶于测试介质的物质，溶解后形成稳定的溶液而且不发生显著的挥发、降解、水解或吸收的，可认为起始溶液浓度为标定浓度值。要有证据能表明测定过程中浓度保持稳定并符合定量标准。 对于以下物质： (i) 在测定介质中溶解性差，或 (ii) 能形成稳定的乳状液或悬浊液的，或 (iii) 在水溶液中不稳定的， 起始浓度应在测定开始时在溶液中进行测定（或者，若技术条件不允许，应在水柱中测量）。浓度测定应溶解平衡一段时间后进行，但应在加入被测有机体之前。 在这些情况下，在测试中应采取进一步措施确定接触物质的实际浓度，满足定量标准。 pH值变化不应超过一个单位。 测定方法概述 1.6.1 试剂 1.6.1.1 被测物质溶液 一定离子强度的储备液用去离子水或符合1.6.1.2标准水溶解测定物配制。 测定所需浓度的溶液用储备液稀释配制，如果测定的是高浓度的，可直接将物质溶于水。 通常测定的物质浓度取决其溶解度。对一些物质（其水溶解度低或有高Pow值或形成的溶液实际为稳定的分散液的），可以不受其溶解度所限进行测定，从而保证获得其最大的可溶/稳定浓度数据。需要注意的是，该浓度下测定系统不被破坏。 超声波分散，有机溶剂，乳化剂或分散剂可辅助用于一些水溶性差的物质储备液的配制，或有助于物质在介质中的分散。当使用这些辅助物质时，测定浓度应包括相同数量的辅助物质，同时对照组中测定水蚤也应使用相同数量的辅助物质。辅助物质的浓度应尽可能低，任何情况下不得大于100毫克每毫升。 测定过程中pH 值不应改变。如果有显著证据表明pH值发生了变化，建议调整pH值重新进行测定并报道结果。在这种情况下，除非有特殊原因储备液的pH值应调整至稀释水的pH值。最好用HCL和NaOH调节pH值。pH值调节过程中，储备液中被测物的浓度不应发生显著变化。如果调节过程中，测定化合物发生化学反应或物理沉淀现象应予以记录。 1.6.1.2.实验用水 本实验使用再造水（ 参照附录1和参考（2）：ISO 6341 ）。为避免在实验前有适应的需要，推荐使用与实验用水有相同质量（pH，硬度）的培养水。 1.6.2.仪器 应使用标准的实验仪器及用具。与实验溶液接触的仪器最好完全是玻璃制的。 －测氧计（有微电极或其他用于测量小体积样品中溶解氧的合适仪器）， －足够的温度控制仪器， －pH计， －测量水硬度的仪器。 1.6.3. 测定用有机体 magna水蚤是很好的测试种类，尽管puLex水蚤也可用于测试。被测动物在实验开始时必须有少于24小时的寿命，是实验室培养的，没有明显疾病，以及有明确历史记录（如培养，以及任何预先处理等）。 1.6.4. 测定步