RACE原理及实验步骤.ppt

;Table of Contents;SMART技术;;First-strand cDNA 合成;5- 3-RACE PCR; 另备物品;;;The relationship of gene-specific primers to the cDNA template. ;;;;;;RACE ;;;;;;;五、cDNA 末端的快速扩增(RACE);* 如果RNA是非人类的，可以跳过此步? 如果特异引物不产生重叠可以跳过此步。;* 如果RNA是非人类的，可以跳过此步? 如果特异引物不产生重叠可以跳过此步。;;六 、RACE 产物的鉴定;;B. Southern Blot Analysis 当RACE 产物有多条带时，用GSPs 或NGSPs制作探针进行Southern blot 可以有把握地确认真正的RACE产物带。通常5-RACE 比 3-RACE易出现多条带。 1. 琼脂糖凝胶电泳检测RACE 产物。 2. 照相、转尼龙膜。 3. 准备探针，探针内不能有GSP1 (or GSP2)的序列。可以将NGSP1 (or NGSP2)进行末端标记。如果GSPs的5 和 3产物有重叠，则可以用GSP2 做探针鉴定5-RACE产物，用GSP1 做探针鉴定3-RACE产物。使用cDNA进行缺口翻译或随机引物扩增都可以制作探针。 ;;;;;;; 八、P