血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验讲义.pptVIP

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验;实验目的;;实验原理;以蛋白质为例：;影响电泳迁移率的因素： 1、内在因素：蛋白所带净电荷的性质和电荷的量、蛋白的大小和形状 2、外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离 子强度和电渗现象;血清中几种主要蛋白组分：;醋酸纤维薄膜电泳;染色剂;实验操作;3.点样： 点样前，将薄膜粗糙面朝上，距一边1.5cm处用铅笔划一条平行线作为点样标志区。 点样时，用点样器毛吸取血清，在薄膜粗糙面上轻而温和地印一下（盖章法）。点样区距阴极端1.5cm（见图）。此步是实验的关键。   醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图（黑线处为点样位置） ;4.电 泳 将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。 连接好电泳仪。在室温下电泳，恒压110V，打开电源开关，电泳时间60 min。电泳后，调节旋钮使电压为零，关闭电泳仪切断电源。;5.染色： 电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5min，染色时可置于摇床，均匀摇晃。 6.漂洗： 将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗3次，每次5 min,直至背景蓝色脱尽，条带清晰为止，取出薄膜放在滤纸