煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的-现代生物医学进展.pdf

现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.14 NO.1 JAN.2014 31 DOI: 10.13241/ki.pmb.2014.01.007 煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA 的比较* 1 1 1 1 1 2 1 夏乐先 孙文娟 沈 振 梁昱婷 柳建设 陈建华 邱冠周 (1 4 10083 2 4 10083) 中南大学资源加工与生物工程学院 湖南长沙 ；中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院 湖南长沙 摘要 目的：在生物浸出中，微生物群落结构分析有着重要意义，而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解 决这一问题，本实验通过比较两种较常用的DNA 提取方法，煮沸裂解法和试剂盒法，寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿 DNA 。 ： 6 DNA DNA 、 细菌基因组 的方法 方法 分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取 种浸矿菌的基因组 ，从所提取的基因组 浓度 纯度、回收率和对PCR 扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果；用两种方法来处理不 浓度梯度的一种菌，通过实时定 PCR 108 1 4 1 量 来比较两种方法的灵敏性。结果：相 处理量（ 个）的革兰氏阳性菌（株）、革兰氏阴性菌（株）、古菌（株）经两种方 DNA 6 DNA 其OD260/OD280 1.8-2.0 DNA 法提取的基因组 差异较大，煮沸裂解法所得的 组基因组 更纯， 的值更接近 （纯 的 OD260/OD280 在1.8-2.0 之间），前者所提DNA 回收率最大可达后 的16.7 倍；煮沸裂解法只需较少菌（102 个）便能让实时定量 PCR DNA ，比试剂盒法灵敏。 ： DNA PCR ，此外，前 提 检测到所提 模板浓度 结论 两种方法提取的基因组 均可用于后续的 扩增 取的DNA 浓度随细菌浓度增加而呈线性增大，而后 随菌浓度增大，所提DNA 量增加有限，因此，在生物浸出中微生物基因组 DNA 的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法，为实验节约成本和时间。 ： ；实时荧光定量PCR 关键词 煮沸裂解法；试剂盒法；浸矿细菌；聚合酶链反应 ：Q93-3 ：A ：1673-6273 2014 0 1-31-05 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） Comparison of Genomic DNA Extraction from Biol