基因的克隆方法-（公开）精选课件.pptVIP

前言 一、 基于基因产物的基因克隆方法 原理：根据蛋白质上的一段多肽的氨基酸序列，反推核苷酸序列，然后设计探针或引物从基因组文库或cDNA文库中分离出相应的基因。 ? 差减杂交（SH） ? 抑制性差减杂交（SSH） ? 差异显示PCR（DD RT-PCR） ? DNA代表性差异分析（DNA RDA） ? 扩增限制性片段长度多样性（AFLP） ? cDNA微阵列 ? 基因突变体的研究：如基因的表达与不表达； ? 基因时空表达的研究：如根、茎、叶； ? 不同处理条件下的基因表达差异：如施肥与不施肥、光照与不光照。 1.2.2 抑制性差减杂交（SSH） 应用 基因突变体的研究：如基因的表达与不表达 基因时空表达的研究：如根、茎、叶 不同处理条件下的基因表达差异：如施肥与不施肥、光照与不光照 1.2.3 差异显示PCR（DD RT-PCR） 最先由Liang等于1992年报道，目前已广泛在实验室使用。 主要原理：利用真核生物mRNA结尾处有POLY（A）结构，在其3`端设计象5`-T11GA样引物，该引物可与mRNA总数的十二分之一结合，从而使这部分基因得到逆转录，同时结合5`端的随机引物（20条10-mer），可以使不同长度的基因得到扩增。 具体操作： 1、提取mRNA； 2、特定引物（12分之一）反转录； 3、特定引物和RP结合RT-PCR； 4、把不同处理的样品扩增产