SPA的纯化、表达与鉴定.docVIP

SPA的纯化、表达与鉴定 中文摘要： 该实验用大肠杆菌做表达载体，然后用IPTG诱导大肠杆菌表达SPA，破碎大肠杆菌提取SPA后用镍柱纯化，再运用SDS、双向免疫扩散法、western blotting等方法对表达的蛋白质进行鉴定，其中制备免疫血清（抗SPA免疫血清）选取的动物为雄性健康成年的家兔。 中文关键词：SPA、SDS、western blotting、双向免疫扩散。 前言 1. SPA的背景 SPA即(Staphylococcal protein A,SPA)葡萄球菌A蛋白，是 葡萄球菌细胞壁的一种表面 蛋白(单链多肽),能与人及某些哺乳类动物的IgG分子的Fc段发生非特异性结合,SPA与IgG结合后的复合物具有抗吞噬,促细胞分裂,致超敏反应和损伤血小板等活性. （一）SPA的主要存在部位 SPA存在于大多数（90％）金黄色葡萄球菌中，而不存在于表皮葡萄球菌中；并且主要存在于血浆凝固酶阳性菌株，而不存在于阴性菌株中。前者是致病的，后者是非致病的，但在体内研究中尚未发现SPA和菌株致病性之间有任何肯定的关系。不同菌株间的SPA含量有明显差异，以I株金黄色葡萄球菌含SPA量最高，和细胞壁的肽聚糖呈共价结合。抗二甲氧基苯青霉素突变株（methicillin-resistant strain）能产生分泌SPA，它较之细胞壁所含的