第二次普通微生物学实验46.pptVIP

实验四 革兰氏染色法 一、目的要求 1 学习革兰氏染色原理，理解着色机理。 2 掌握革兰氏染色的方法，并能正确染色。 3 巩固无菌操作技术 4 巩固显微镜油镜的使用方法 二、基本原理 是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。 革兰氏染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法。 革兰氏染色是是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。 其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。 革兰氏染色原理： 第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。 1 2 3 4 结晶紫 碘液 酒精 复红 三、实验材料 大肠杆菌（24h培养）斜面菌种 枯草杆菌（12h培养）斜面菌种 四、方法步骤 1　涂片、干燥、固定：同简