12生物基因工程的基本操作程序1.pptVIP

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 　基因操作的基本步骤 目的： 所需物质： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 它们各自的作用是什么? 基因表达载体的组成及作用： 基因表达载体的构建过程 将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成一个重组DNA分子(重组质粒)。构建过程如图所示： 1、载体和表达载体的区别： 二者都有标记基因和复制原点这两部分DNA片段。表达载体在载体的基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 2、用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 3、启动子、终止子对于目的基因的表达必不可少 4、目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去 1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 1.目的基因导入植物细胞 常用的方法: 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 农杆菌的特点: c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的D