生物选修一复习.ppt

（多聚酶链式反应）PCR技术反应过程中控制不同温度的意义及步骤： (1)90℃以上时变性，双链DNA解聚为单链； (2)50℃左右时复制，引物与两条单链DNA结合； (3)72℃左右时延伸，Taq DNA聚合酶有最大活性，使DNA新链由5′端向3′端延伸。 血红蛋白的提取和分离方法 (1)凝胶色谱法 ①含义：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。 ②原理 a．相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。 b．相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。 (2)电泳法 ①含义：带电离子在电场作用下发生迁移过程。 ②原理：利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异和分子本身大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离 实验操作程序 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：除去血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化； ②血红蛋白的释放：使红细胞涨破，血红蛋白释放出来； ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的转化。 (2)粗分离——透析：除去样品中分子量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 注意 植物有效成分的提取 提取方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 萃取法 实验原理 利用水蒸气将挥发性的芳香油携带出来 通过机械加压，压挤出果皮中的芳香油 有效成分溶解在有机溶剂中，蒸发出溶剂就可得到产品 方法步骤 水蒸气蒸馏；分离油层；除水过滤 石灰水浸泡、漂洗 　↓ 压榨、过滤、静置 　↓ 再次过滤 粉碎、干燥 ↓ 萃取、过滤 ↓ 浓缩 适用范围 如玫瑰精油、薄荷油等挥发性强的芳香油 如柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取 如胡萝卜素的提取范围较广，原料细小，充分浸泡在有机溶剂中 ①植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和萃取，根据蒸馏过程中原料放置的位置不同，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。 ②水中蒸馏法不适用于柑橘和柠檬等原料的提取，这是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等。 植物的组织培养技术 考一考 蛋白质的提取和分离、PCR技术 三、植物有效成分的提取 一、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．选择合适的培养基 (1)根据培养基的用途可分为选择培养基和鉴别培养基，这部分内容中既用到选择培养基又用到了鉴别培养基。 2．统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法----直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 ②方法：用计数板计数。 ③缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)稀释涂布平板法----间接计数法(活菌计数法) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长着一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 3．细菌分离与计数的实验流程 土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数。 二、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶 是一种复合酶，它包括C1酶、Cx酶