71基因工程和细胞工程.pptVIP

* 专题七　现代生物科技 第一讲　基因工程与细胞工程 核心要点突破 一、DNA重组技术的基本工具 质粒、噬菌体、动植物病毒 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 EcoRI限制酶 Sma I限制酶 常用 类型 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 (2)有多个限制酶切割位点 (3)具有特殊的标记基因 (1)E·coli DNA连接酶只连接黏性末端 (2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端 (1)识别特定的核苷酸序列 (2)在特定位点上切割 作用 特点 (条件) 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 作用 部位 携带目的基因进入受体细胞 连接DNA片段，形成重组DNA 切割目的基因和运载体 作用 运载体 DNA连接酶 限制酶 二、基因工程的基本操作程序 1．基因工程的基本操作程序分析 (1)目的基因的获取途径 ①可以从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因组文库或cDNA文库中获取。 ②人工合成目的基因(化学方法合成或逆转录) ③利用PCR技术扩增目的基因。通过PCR技术对已获取的目的基因进行扩增，可获取大量目的基因。 (2)基因表达载体的构建 ①基因表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。 ②基因表达载体的构建方法 (3)将目的基因导入受体细胞 原核细胞 受精卵 受精卵 体细胞(需经组织培养) 受体细胞 感受态细胞法(用Ca2＋处理) 显微注射技术 农