复习dna重组技术的基本工具.pptVIP

【典例训练2】（2011·山东高考改编）人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。 （1）图中的高血压相关基因作为________，质粒作为_______， 二者需用__________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上 含有__________有关。 （2）重组DNA导入的受体细胞是大鼠的__________细胞，常用的 方法是_________。在DNA重组过程中核心的操作是________。 （3）子代大鼠如果__________和__________，即可分别在分子 水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用 其建立高血压转基因动物模型。 （4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程 技术是体外受精、早期胚胎培养和__________。 【解题指南】 1.考查实质 本题主要考查基因工程的操作程序，涉及到胚胎工程技术。 2.解题关键 高血压相关基因与质粒形成重组DNA后导入到受精卵细胞中，是DNA重组技术。 【解析】（1）根据题干中“利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠”推出，目的基因为与高血压相关的基因。为使目的基因与载体结合需用同一种限制性核酸内切酶切割。 （2）重组DNA分子导入受体细胞中，植物细胞、动物细胞和微生物细胞导入目的基因的方式不同，动物细胞主要用显微注射技术将重组DNA分子导入细胞中。基因工程操作的第二步，即基因表达载体的构建是整个过程中的关键。 （3）如果检测到相应蛋白质，即可在分子水平说明目的基因已经表达，如果检测子代大鼠已患高血压，即可在个体水平说明目的基因已经表达。 (4)在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植。早期胚胎需要移植入体内，以提供一个稳定的环境和充足的营养供应。 答案：（1）目的基因 载体 同一种限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的切割位点 （2）受精卵 显微注射技术 基因表达载体的构建 （3）检测到相应蛋白质 已患高血压 （4）胚胎移植 【互动探究】（1）如果把鼠换成植物，则导入受体细胞的常用方法改变吗？ 提示：变成农杆菌转化法。 分析：植物细胞与动物细胞具有不同的特点，导入的方法是根据操作的需要进行的，如利用农杆菌易感染植物的特性。 （2）分子水平检测除蛋白质检测外还有什么检测方法? 提示：DNA分子杂交、核酸分子杂交。 分析：利用DNA探针检测目的基因或相应的mRNA存在与否，说明目的基因是否存在或是否转录。 一、基因工程的概念理解 1.供体：提供__________ 2.操作环境：______ 3.操作水平：__________ 4.原理：__________ 5.受体：表达目的基因 6.本质：性状在______体内表达 7.优点：克服_______________障碍，定向改造生物_____ 目的基因 体外 分子水平 基因重组 受体 远缘杂交不亲和 性状 一、基因工程诞生的理论基础 1．基因拼接的理论基础 (1)DNA是生物的主要遗传物质。 (2)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。 (3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。 化学本质相同，都是DNA；基因与质粒的 结构相同 2．外源基因在受体内表达的理论基础 (1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。 (2)遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向。 (3)生物界共用一套遗传密码。 胰岛素基因重组后能在细菌细胞内表达， 还说明所有生物共用一套遗传密码 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶（简称：限制酶） （1）来源：主要从______生物中分离纯化出来。 议一议：限制酶主要存在于原核生物中，它有什么意义？答案：限制酶在原核生物中主要是切割外源DNA，使之失效，从而达到保护自己的目的。 原核 （2）作用：识别特定的___________并切开 相应两个核苷酸之间的_____________。 核苷酸序列 磷酸二酯键 （3）结果：产生__________或平末端。 黏性末端 2.DNA连接酶 （1）种类：按来源可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 （2）作用：在两个核苷酸之间形成____________以连接______________。 两段DNA片段 磷酸二酯键 3.载体 （1）种类：_____、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 能__________ 有一个至多个________________ 有特殊的__________ 【点拨】提取目的基因和切割载体使用同一种限制酶，目的是能形成相同的黏性末端，形成重组DNA分子。 质粒 自