固定化酶制备及酶活力测定.pdfVIP

协同致远 创新至尖 绿色发展 和谐制药 固定化酶制备及酶活力测定 实验者：张伟达 绿色制药1402班 201430360226 同组者：张朝焕、张颖琼 实验日期：2016年5月30 日 报告完成日期：2016年6月1 日 指导老师：易 喻 【摘 要】酶的固定化技术是用物理或化学方法处理水溶性酶使之成为不溶于水或溶于固定 相载体后仍具有活性的酶的衍生物，固定化酶不但具有一般酶的特性，而且还可以长期重复 使用，具有较高的经济效益。本实验采用包埋法进行酶的固定化，并使用福林酚法测定碱性 蛋白酶的酶活力（即酶所催化的化学反应的速度）。根据实践可知：包埋法固定化酶条件相 对温和，能够重复使用，但方法本身会一定程度上造成酶的活力的降低。 【关键词】固定化酶技术 酶 包埋法 福林酚法 酶活力 【Abstract】Technology of immobilized enzyme is physical or chemical methods were used to deal with water soluble enzyme to become insoluble in water or dissolved in stationary phase carrier still has derivatives of the activity of the enzyme, immobilized enzyme not only has general enzymatic properties, but also can be repeatedly used for a long time, has high economic benefit. In this experiment the embedding method of enzyme immobilization, and using the Folin phenol method for the determination of the enzyme activity of alkaline protease (i.e., the enzyme that catalyzes the chemical reaction speed). According to the practice, it can be known that the condition of immobilized enzyme is relatively mild, and can be used repeatedly, but the method itself will cause the enzyme activity to be reduced to a certain extent. 【前 言】酶的固定化是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。通 常酶催化反应都是在水溶液中进行的，而固定化酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理，使 之成为不溶于水的，但仍具有酶活性的状态。酶活力指酶催化某些反应的能力。酶活力可用 一定条件下它催化的某一化学反应的反应速度来表示。为了灵敏起见，通常测定单位时间内 产物的生成量。由于酶促反应速度随时间推移而降低，为正确测得其活力，必须测定反应的 初速度。碱性蛋白酶在碱性条件下可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸。酪氨酸为含有酚羟基的 氨基酸，可以福林试剂（磷钨酸与磷钼酸的混合物）发生福林酚反应。利用比色法测定酪氨 酸的量，用碱性蛋白酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表示酶活力。 1 协同致远 创新至尖 绿色发展 和谐制药 1. 实验过程 1.1 试剂与仪器 1.1.1 试剂 ①海藻酸钠，0.3%氯化钙 ②碱性蛋白酶（1.