免疫荧光组化.ppt

第六讲免疫荧光组化技术 主要内容 一、荧光的特征 二、荧光素 三、荧光素标记抗体的方法 四、荧光抗体的质量鉴定 五、免疫荧光组化染色方法 六、荧光显微镜 七、非特异性荧光的消除方法 八、激光扫描共聚焦显微镜 思考题： 1.什么叫荧光？ 2.常用荧光素有哪些特征？ 3.标记荧光抗体有哪二种主要的制备方法？ 4.免疫荧光组化直接法、间接法的 原理和主要操作流程？ 5.观察荧光组化片时应注意哪些问题？ 6.非特异性荧光的消除方法有哪几种？ 一、荧光的特征 分子都含有电子，电子在不停地运动着。根据量子理论，运动着的电子可以处于一系列不连续的能量状态中，电子遵守一定的规则，要以从一个能级向另一能级跃迁，并伴随着与能级差相对应的特定能量的吸收或释放。 激发 当电子吸收能量跃迁到较高能级， 这个过程叫激发。发射 以辐身方式跃迁时，能量转化成相 应波长的光，这个过程叫发射。 荧光 跃迁到激发态的电子，大多处于单重激发态。如果电子直接从单重激发态以辐身方式跃迁到基态，由于单重激发态很不稳定，半衰期很短，发射持续的时间也很短，这种发射光，叫荧光。 二、荧光素 能够产生荧光并能作为染料的化合物称为荧光色素，必须具备：吸收激发光的光能并发射荧光