井震联合非均质储层改造规模的非线性表征方法-北京大学学报.pdf

北京大学学报(自然科学版) 第 52 卷 第 2 期 2016 年 3 月 Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Pekinensis, Vol. 52, No. 2 (Mar. 2016) doi: 10.13209/j.0479-8023.2015.148 小球藻Chlorella variabilis NC64A 二酰甘油酰基 转移酶基因的克隆表达与功能研究 † 杨金水 高全秀 李兆胜 邢冠岚 袁红莉 农业生物技术国家重点实验室 , 中国农业大学生物学院, 北京 100193; † E-mail: yangjsh1999@163.com 摘要 为了揭示二酰甘油酰基转移酶(DGAT)在小球藻油脂合成过程中的作用 , 对单细胞小球藻 Chlorella variabilis NC64A 的二酰甘油酰基转移酶进行原核克隆表达及功能初步研究。结果表明, 其编码序列为 894 bp, 编码 297 个氨基酸, 表达蛋白的表观分子量为 33 kDa, pI 9.48 。保守结构域分析表明, 该蛋白属于 Lyso- phospholipid acyltransferases (LPLATs)超家族, 具有二酰甘油酰基转移酶活性, 序列位点 H68, L71, F76, R94, I97 和 GAA (144146)组成特定的酰基受体结合口袋, 能够结合酰基酰基载体蛋白(ACP)或者酰基辅酶 A 上 的酰基, 催化三酰甘油合成的最后一步。表达蛋白与 SsPDAT 和 AtPDAT 的序列相似性分别为 32%和 24%, 表明该蛋白可能具有磷脂酰甘油酰基转移酶(PDAT)活性, 能利用磷脂上的酰基合成三酰甘油。因此, 采用薄 层层析方法以 L- α-磷脂酰胆碱和 1,2-二油酰-sn-甘油为底物, 检测到其确实具有 PDAT 活性, 表明限氮条件 下 NC64A 中 DGAT 的 PDAT 活性可能促进了膜脂降解耦合三酰甘油的合成。 关键词 Chlorella variabilis; 三酰甘油; 二酰甘油酰基转移酶; 磷脂酰甘油酰基转移酶; 克隆表达 中图分类号 Q786 Clone, Expression and Function Analysis of Diacylglycerol Acyltransferase Gene from Chlorella variabilis NC64A † YANG Jinshui , GAO Quanxiu, LI Zhaosheng, XING Guanlan, YUAN Hongli State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100193; † E-mail: yangjsh1999@163.com Abstract To reveal the function of diacylglycerol