08-高效液相色谱法w.pptVIP

* 8.4 高效液相色谱流动相 4. 选择流动相时应注意的几个问题 ? 尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 ? 化学惰性好，不与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 * 8.4 高效液相色谱流动相 ? 试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 ? 低黏度。黏度太大会降低样品组分的扩散系数，造成传质减慢，柱效下降，同时引起柱压升高。 ? 流动相同时还应满足检测器的要求。如当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 * 8.5 影响分离的因素 1. 提高柱效的途径 在高效液相色谱中，液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/u 较小，可以忽略不计，即： 液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示： H = A + C u * ? 液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 ? 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 ? 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。一般采用恒温。 ? 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 P282-284 8.5 影响分离的因素 * 8.5 影响分离的因素 2. 流速对分离的影响 但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。 * 8.5 影响分离的因素 3. 固定相和色谱柱的影响 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。 但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。 * 8.6 分离类型的选择 1. 根据相对分子质量选择 ? 相对分子质量非常低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱。 ? 标准液相色谱类型（液-固、液-液、及离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是200-2000。 ? 对于相对分子质量大于2000的样品，则用尺寸排阻法为最佳。 * 2. 根据溶解度选择 ? 弄清样品在水、异辛烷、苯、四氯化碳、异丙醇中的溶解度是很有用的。 8.6 分离类型的选择 ? 如果样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳； ? 如样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液-固吸附色谱； * 2. 根据溶解度选择 8.6 分离类型的选择 ? 如样品溶解于四氯化碳，则多采用常规的分配和吸附色谱分离； ? 如样品既溶于水又溶于异丙醇时，常用水和异丙醇的混合液作液-液分配色谱的流动相，以憎水性化合物作固定相。 * 8.6 分离类型的选择 3. 根据分子结构选择 ? 用红外光谱法预先简单地判断样品中存在什么官能团。然后确定采用什么方法合适。 ? 酸、碱化合物用离子交换色谱； ? 脂肪或芳香族用液-液分配色谱、液一固吸附色谱； ? 异构体用液-固吸附色谱； ? 同系物不同官能团及强氢键的用液-液分配色谱。 * 8.6 分离类型的选择 * 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 分析色谱柱：内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 半制备柱：内径8 mm，长度15 ～ 30 cm，一次制备量0.1～１mg。 8.7 制备液相色谱 制备柱：内径20～50 mm，柱长50 cm。 * 1.色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。 8.7 制备液相色谱 * 2. 液相制备色谱的方法 （1）主峰可获得良好分离；使用制备柱，超载提高效率。 （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 * 3. 制备型液相色谱 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。 * 1. 现需分离分析一氨基酸试样，拟采用哪种色谱？ 2. 提高液相色谱中柱效的最有效途径是什么？ 3. 何谓反相液相色谱？何谓正相液相色谱？ 4. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 5. 在液相色谱中，范氏方程中的哪一项对柱效的影响可以忽 略？ 6. 对下列试样，用液相色谱分析，应采用何种检测器：（l）长链饱和烷烃的混合物 （2）水源中多环芳烃化合物。 7. 对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析，采用哪种液相色谱法？ 8. 什么是化学键合固定相？它的突出优点是什么？ 9.