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等温滴定量热法及
生物测定中的应用
1332035 13级中药 齐睿娟
2015-3-27
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目录
ITC简介
ITC测量原理
ITC应用与优势
ITC与中药
等温测定量热法(ITC)
等温滴定量热法 (isothermal titration calorimetry ITC) 是一种微量热方法, 以参加反应的物质总浓度变化和反应的热量变化为函数, 结合一定的数学模型, 获取热力学参数。是一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法,它可直接测量生物分子结合过程中释放或吸收的热量。
等温测定量热法(ITC)
实验步骤
ITC 测量原理
在恒温下,注射器中的“配体”溶液滴定到包含“高分子”溶液的池中。当配体注射到池中,两种物质相互作用,释放或吸收的热量与结合量成正比。当池中的高分子被配体饱和时,热量信号减弱,直到只观察到稀释的背景热量。
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配体溶液20次注射到ITC池的蛋白溶液中。每个注射峰(上图)下方的区域与注射所释放的总热量相等。当这种综合的热量相对添加到池中的配体摩尔比作图时,就获得了相互作用的完整结合等温线(下图)。
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ITC优势
灵敏度高
实时在线
差热功率补偿系统,
可快速平衡以适应连续滴定
无标记液相环境
无需靶点高分子或配体的固定
。。。
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ITC应用
药物
广泛用于药物发现和开发领域的以下方面
量化结合亲和力
候选药物的选择与优化
测定热力学特性和活性浓度
作用机制表征
在小分子药物发现过程中确认预期结合靶标
测定结合特异性和化学计量
验证从苗头化合物到先导化合物演化过程中的IC50值和EC50值
酶动力学测定
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ITC与中药
有研究者,利用等温滴定量热技术来检测中药注射液与其他药物之间溶合的热效应情况,从而来判断并评价联合用药的安全性。
thanks
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