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文献总结 ——固定化酶 超声对酶促反应的影响（一） Stephen等研究了超声对α-淀粉酶，淀粉葡萄糖苷酶，蔗糖转化酶酶促作用的影响。 将底物和相应的酶置于超声水浴中反应一定时间后，用DNS试剂与生成的还原糖反应，测定其吸光值。 考察不同底物浓度与反应速率之间的关系。 以非超声条件下的酶促反应速率作为对照。 超声增加α-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶的酶促反应速率。原因很可能是超声提高了反应温度，使酶与底物分子更充分的混合，从而利于酶促反应的发生。 蔗糖转化酶在水解蔗糖的过程中有底物抑制作用，超声能够有效降低这种作用的影响。原因是超声可能影响其底物分子和溶剂水分子的分子间作用。 超声对酶促反应的影响（二） Kawasaki使用特定频率的超声波，通过调节多肽的动力学控制酶促反应。其研究考察了嗜热菌蛋白酶和DNA聚合酶的酶促反应。 对于嗜热菌蛋白酶，几百kHz的超声强度能够促进其酶促反应。 研究DNA聚合酶的反应时使用了石英晶体微天平技术（它是一种非常灵敏的质量检测仪器，其测量精度可达纳克级，比灵敏度在微克级的电子微天平高100 倍，理论上可以测到的质量变化相当于单分子层或原子层的几分之一。）监测Klenow片段连接到DNA模板后，模板质量的变化，从而研究酶促反应的动力学。 研究固定化酶的酶促反应 Ghiaci等分别用钠基膨润土和改性膨润土对碱性磷酸酯酶固定化，研究不同实验条件下固定化酶的反应活性。研究充分考虑到酶浓度，pH，温度，搅拌和变化的热力学参数对酶促反应的影响。 酶促反应在0.1M磷酸盐缓冲液，pH7.0条件下最强。pH=10时达到最佳反应状态。4℃下磁力搅拌的最佳时间周期为2小时。 实验过程 1 分别使用钠基膨润土和改性膨润土固定化碱性磷酸酯酶。 2 测定磷酸酯酶活性APhA 磷酸酯酶催化pNPP磷酸对硝基苯酯生成 pNP 对硝基酚， 37℃下反应1h后加入NaOH终止反应。410nm下测定吸光值。 3 测定动力学参数。Km Vmax 实验过程 4 检测稳定性 储藏稳定性： 4℃，50天；30℃，70天 热稳定性： 25-80℃ 水解稳定性： 链酶蛋白酶 37℃ 0-6天 5 研究pH值对酶促反应的影响 6 测定总蛋白含量：BSA法 结果与讨论 X射线衍射 SEM投射电镜 观察结构，孔径 比表面积，孔容量，孔径——后两者影响酶促反应。孔容量和孔径越大，越利于酶的融入与固定化。孔容量和孔径小，会限制传质和酶的透过，发生边界吸收作用。 Langmuir吸附等温线：量化碱性磷酸酯酶与膨润土之间的作用。 膨润土的固定化能力：APhA；Protein 计算反应动力学方程 米氏方程 结果与讨论 pH值对酶促反应的影响 磁力搅拌对酶促反应的影响 固定化酶与游离酶的稳定性 储藏稳定性 热稳定性 水解稳定性 * * * *
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