TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展.pdfVIP

临床检验杂志( 电子版)2015 年3 月第4 卷第1 期Clinical Laboratory Journal(Electronic Edition) ，Vol.4 ，No.1 ，Mar ，2015 797 TaqMan 探针法实时荧光定量PCR 的应用和研究进展 姜文灿，岳素文，江洪，王成彬1 姜文灿，温州医科大学检验医学院、生命科学学院2014级硕士研究生。主要研究方向为分子 生物学技术。 [摘要] TaqMan 探针法实时荧光定量PCR 因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用， 内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度，增加了其可靠性和实用性。然而，这一技术也因为假阴性和假阳性问题存 在着改进的空间。本文从TaqMan 探针法的简介、研究进展以及应用前景展开综述。 [关键词] 实时荧光定量PCR ；TaqMan 探针；引物二聚体；内标系统 [中图分类号] R446.6-3 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 2095-2775 （2015 ）01-0797-09 Application and research progress of TaqMan probe real time PCR [Abstract] TaqMan real-time PCR has been widely used in various fields because of its good repeatability, strong specificity, wide linear range, etc. Import of the internal control (IC) system further improved the sensitivity of this method, consequently increased its reliability and practicability. However, there are still some improve rooms for this technique because of the false negative and false positive problem. Here we proceed a review for TaqMan real-time PCR cover its introduction, research progress and applicative prospect. [Key words] Real-time fluorescent quantitative PCR; TaqMan; primer dimer; IC 聚合酶链式反应 ( Polymerase Chain 学、生物科学、政治法律等方面得到了广泛的应 [3-6] Reaction, PCR ) 是在体外模拟体内核酸复制从 用 。 而获取大量目的基因拷贝的技术，最早由 Mullis[1]发明。其几何级数的放大模式，相比于 1 TaqMan 探针法简介 普通信号叠加的检测方法灵敏度提升了上百万 1.1 原理 TaqMan 探针的基本原理是利用扩增 倍，同时又因操作简便，成为核心技术之一。实 过程中Taq 酶的5’核酸外切酶活性切割与靶序列 时荧光定量 PCR 是在传统 PCR 基础上加入信 结合的寡核苷酸探针，该探针5’端标记荧光报告 号系统达到实时监测 PCR 扩增的目的，继承了 基团，3’端标记荧光淬灭基团并被磷酸化以防止 [7] 传统 PCR 高灵敏度和操作简便的特点，