第十一讲PCR技术.pptVIP

分子杂交 一、 Southern杂交 二 、Northern杂交 三、 菌落原位杂交 四 、Western杂交 一、Southern杂交 这种方法是E.M.Southern1975年建立,是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列。 1.预处理： （1）用限制性内切酶将基因组DNA进行酶切。 （2）将酶切后的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳。 （3）将电泳出来的那块凝胶泡在强碱溶液中，此时双链的DNA样品变成单链DNA结构。 （4）用酸中和，使单链DNA维持其单链状态 2.原位转移： 将凝胶上的单链DNA转移到滤膜上。 3.固定： 在真空烤箱里，80℃下烤1-3h。将核酸样品进一步固定在滤膜上 4.杂交： 将滤膜移在含有放射性同位素标记的探针分子溶液中，溶液上的单链DNA分子与探针分子通过互补配对进行杂交，形成杂种分子。 5.漂洗： 将滤膜上没有和单链DNA样品结合的游离的探针分子漂洗下来，此后滤膜上只有杂交分子。 6.放射自显影： 在X光曝射下进行放射自显影形成自显影图片。 7.比较鉴定： 将放射自显影图片上的谱带与凝胶上的谱带进行比较。确定与探针分子结合的DNA分子是凝胶上D