基因工程综合.docVIP

基因工程：通过载体将目的基因转入靶细胞以改变靶生物的遗传性状的技术。 基因工程技术的基本环节：①目的基因克隆②载体的准备③目的基因与载体的连接④重组DNA导入受体细胞⑤重组体的筛选与鉴定⑥重组体的大量培养表达 基因工程从哪几方面来影响生物性状：①强化基因的表达，改善生物性状②关闭特定基因的表达，改善生物性状③导入外源基因，表达新性状 RE：特异性识别短的双链DNA序列并切割靶位点或别处的酶。 同尾酶：一类来源不同，识别的靶序列也各不相同，但切割后能产生相同粘性末端的酶。 酶的星号活性：RE识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割位点的非特异性，这种现象称为~ DNA连接酶：在双链DNA的单链缺口之间，使相邻的3’-OH和5 DNA聚合酶：在有引物的情况下DNA模板的指导下合成子代DNA的酶。 简述Ⅱ型RE的基本特点：1)识别序列的特异性：识别序列长度为4~6bp具有双重旋转对称结构的回文序列2）切割位点的特异性①酶切片段的末端可以是粘性末端和平末端②同裂酶③同尾酶 影响RE活性的因素：①酶的纯度②DNA样品的纯度③DNA的甲基化程度④酶切反应的温度⑤DNA分子的构型⑥反应缓冲液⑦酶的星号活性 载体：能携带外源基因（或DNA片段）进入细胞复制、整合或表达的工具称为载体。 克隆载体(cloning vector)为使插入的外源D