实验二、叶绿素a和同化系数- Q的测定演示课件.ppt

⑴标准叶绿素a校正法：用纯叶绿素a配成母液，把母液稀释成一系列不同浓度的溶液并分别测定荧光读数，最后用直线回归法算出标定线的斜率，即Fd。 ⑵分光光度计校正法：取一定体积处于指数生长期的单细胞藻类，按分光光度法测定叶绿素a的方法，测其吸光值E，按（1）式计算该提取液的Cchl-a。然后将它在荧光计上测定荧光值Rb，按（7）式求得Fd。本实验采用分光光度计校正法。 (7) 3、同化系数的测定 把叶绿素a含量换算成调查海区的初级生产力，必须乘以一个比例系数，称为同化系数，用Q表示。一般在光饱和条件下，同化系数的值最大。但应当指出，不同类型的藻类种群或同一种群在不同的环境中，同化系数是不一样的。因此，最好先用C14示踪法现场测定同化系数。在无C14示踪法测定Ｑ的条件下可根据浮游植物光合过程中释放出氧的量换算成有机碳的固定量，以此固定值除以叶绿素a和培养时间即为同化系数Q。 若假设符合光合作用的理想方程为 CO2＋H2O　→ CH2O＋O2，将所产生的氧的单位转换成固定碳的单位，则有： （8） 式中Q—同化系数，单位为mgC(mgChl-a)-1h-1； h—光照时间（h）； Chl-a—光照水样的叶绿素a含量（mg/m3）； Ol、Od—分别为“白”瓶和“黑”瓶中的溶解氧含量（mgO2/L）。 4、初级生产力的估算 PP=Chl-a×Q× (9) 式中，PP—每日生产力（mgC/m3?d）； Chl-a －海洋水样的叶绿素a值（用荧光法测定的数值，单位mg/m3）； D—每日的光照时间，冬天取12h，夏天取13h。 三、仪器与试剂 1、仪器和玻璃器皿 752紫外光栅分光光度计1台 GFY－160荧光光度计1台 LRH-250-G型光照培养箱 960MR荧光光度计1台 离心机1台 过滤器1个 医用真空吸引器 一台 0.45μm微孔醋酸纤维滤膜若干张　　 250mL BOD瓶2个（黑白各1个） 黑布若干块 碘量瓶 2个　 具塞刻度试管4支 100mL量筒1个　 　水样桶2个 碱式滴定管1根 10mL移液管 1支 2mL移液管 3支 1mL移液管 1支 10mL移液管 1支 2、试剂 （1）90% 丙酮：100mL蒸馏水加上900mL丙酮贮于棕色瓶中。 （2）1% MgCO3：取1g MgCO3溶于100mL蒸馏水中，使其过饱和，盛入100mL点滴瓶中，使用前摇匀。 (3) 0.01mol/L Na2S2O3溶液。 （4）0.0100 mol/L KIO3标准溶液。 （5）MnCl2溶液：210g MnCl2·4H2O溶于水并稀释至500mL。 （6）碱性KI溶液：250g NaOH在搅拌下溶于250mL水中，冷却后加75g KI稀释至500mL盛于具橡皮塞的棕色试剂瓶中。 （7）1+1 H2SO4 （8）1＋3 H2SO4 （9）0.5％淀粉指示剂 （10）固体KI 四、实验内容 1、换算因子Fd的确定 用量筒平行移取二份某海区水样（记为A样）约100－500mL（视浮游植物含量而定，移取水样前应将水样混匀），加入1mL 1% MgCO3溶液混匀后，用微孔滤膜（? =45mm，0.45?M）真空抽滤（真空度小于0.5atm）。将滤膜转移至10mL具塞的试管中，加入10mL90% 的丙酮溶液，混匀，置冰箱冷冻16-24小时（本实验由于时间关系，应置冰箱一周）后取出，用玻棒搅匀，待温度达室温时离心10min（离心速度 = 3000－4000r/min），取上清液于1cm比色皿中。 先用752紫外可见光光度计于750，664，647，630nm波长测其消光值，按（1）和（4）式计算Cchl-a和Chl-a浓度。测定时用90％的丙酮溶液调零。 接着将此提取液用荧光计测其荧光