第七章 发酵过程染菌及其防治.ppt

要杜绝无菌空气带菌，就必须从空气的净化工艺和设备的设计、过滤介质的选用和装填、过滤介质的灭菌和管理等方面完善空气净化系统。 二、空气带菌及其防治 加强生产环境的卫生管理，减少生产环境中空气的含菌量，正确选择采气口，如提高采气口的位置或前置粗过滤器，加强空气压缩前的预处理，如提高空压机进口空气的洁净度。 设计合理的空气预处理工艺，尽可能减少生产环境中空气带油、水量，提高进入过滤器的空气温度，降低空气的相对湿度，保持过滤介质的干燥状态，防止空气冷却器漏水，防止冷却水进入空气系统等。 设计和安装合理的空气过滤器，防止过滤器失效。 通常对于淀粉质培养基地灭菌采用实罐灭菌较好，一般在升温前先通过搅拌混合均匀，并加入一定量的淀粉酶进行液化；有大颗粒存在时应先经过筛除去，再行灭菌；对于麸皮、黄豆饼一类的固形物含量较多的培养基，采用罐外预先配料，再转至发酵罐内进行实罐灭菌较为有效。 在灭菌升温时，要打开排气阀门，使蒸汽能通过并驱除罐内冷空气，一般可避免“假压”造成染菌。 要严防泡沫升顶，尽可能添加消泡剂防止泡沫的大量产生。 避免蒸汽压力的波动过大，应严格控制灭菌温度，过程最好采用自动控温。 发酵过程越来越多的采用自动控制，一些控制仪器逐渐被应用。一般常采用化学试剂浸泡等方法来灭菌。 三、操作失误导致染菌及其防治 设备渗漏主要是指发酵罐、补糖罐、冷却盘管、管道阀门等，由于化学腐蚀（发酵代谢所产生的有机酸等发生腐蚀作用）、电化学腐蚀、磨蚀、加工制作不良等原因形成微小漏孔后发生渗漏染菌。 防治：日常加强监测和检查，及时清除“死角”。 四、设备渗漏或“死角”造成的染菌及其防治 一、种子培养期染菌的处理 6、杂菌污染的挽救与处理 一旦发现种子受到杂菌污染，该种子不能再接入发酵罐中进行发酵，应经灭菌后弃之，并对种子罐、管道等进行仔细检查和彻底灭菌。 采用备用种子，选择生长生产无染菌的种子接入发酵罐，继续进行发酵生产。 如无备用种子，则可选择一个适当菌龄的发酵罐内的发酵液作为种子，进行“倒种”处理，接入新鲜的培养基中进行发酵，从而保证发酵生产的正常进行。 第四节 杂菌污染的挽救和处理 当发酵前期发生染菌后，如培养基中的碳、氮源含量还比较高时，终止发酵，将培养基加热至规定温度，重新进行灭菌处理后，再接入种子进行发酵； 如果此时染菌已造成较大的危害，培养基中的碳、氮源的消耗量已比较多，则可放掉部分料液，补充新鲜的培养基，重新进行灭菌处理后，再接种进行发酵。 也可采取降温培养、调节pH值、调整补料量、补加培养基等措施进行处理。 二、发酵前期染菌的处理 发酵中、后期染菌或发酵前期轻微染菌而发现较晚时，可以加入适当地杀菌剂或抗生素以及正常的发酵液，以抑制杂菌的生长速度，也可采取降低培养温度、降低通风量、停止搅拌、少量补糖等其它措施，进行处理。 如果发酵过程的产物代谢已达到一定水平，此时产品的含量若达一定值，只要明确是染菌也可放罐。 对于没有提取价值得发酵液，废弃前应加热至120℃以上、保持30min后才能排放。 三、发酵中、后期染菌处理 染菌后的发酵罐在重新使用前，必须在放罐后进行彻底清洗，空罐加热灭菌至120℃以上、保持30min后才能使用。也可用甲醛熏蒸或甲醛溶液浸泡12h以上等方法进行处理。 四、染菌后对设备的处理 症状 如：发酵液光密度不上升或回降；pH值逐渐上升；氨利用停止；糖耗、温升缓慢或停止；产生大量泡沫，使发酵液呈粘胶状；镜检时菌体数量显著减少，甚至找不到完整菌体；发酵周期延长、产物生成量减少或停止等。 第五节 噬菌体污染及其防治 根源 防治 环境污染噬菌体是造成噬菌体感染的主要根源 ① 严禁活菌体排放，切断噬菌体的“根源”； ② 做好环境卫生，消灭噬菌体与杂菌； ③ 严防噬菌体与杂菌进入种子罐或发酵罐内； ④ 抑制罐内噬菌体的生长； ⑤ 轮换使用菌种或使用抗性菌株 第五节 噬菌体污染及其防治 挽救措施 尽快提取产品 药物抵抗（如四环素可抵抗乳糖杆菌噬菌体；吐温60等表面活性剂可抑制噬菌体的增殖和吸附） 罐内灭噬菌体法（60-70℃，5min可灭活） 第五节 噬菌体污染及其防治 本章要求 掌握发酵染菌的影响、判断、防治及处理 掌握噬菌体污染的症状及防治方法 发酵染菌及防治 第七章 黄小龙 发酵染菌：指在发酵过程中除生产菌以外的其他微生物侵入了发酵系统，从而使发酵过程失去真正意义上的纯种培养。 第一节 发酵异常现象及染菌分析 一、种子培养和发酵的异常现象 二、染菌的检查和判断 三、发酵染菌原因分析 发酵过程中的种子培养和发酵的异常现象是指发酵过程中某些物理参数、化学参数或生物参数发生与原有规律不同的改变，这些改变必然影响发酵水平，使生产蒙受损失。 一、种子培养和发酵的异常现象 （一）种子培养异常