《基因组学》（第4版）-复旦大学 28-第11章 基因组复制-真核生物.pptVIP

第11章 真核生物DNA复制 真核生物复制起始点 酵母基因组复制起始点-ARS 1) 酵母复制起始点又称为ARS( autonomously replication sequence). 2) 酵母复制起始点含4个亚功能区: A和B1: ORC (Origin Recognition Complex, 起始识 别复合物)识别顺序(origin recognition sequence), 为复制调控区. B2: 与大肠杆菌oriC中的13 bp类似, 起始解链区. B3: ABF1因子结合位置, 产生扭曲力,促使B2解链. 酵母ARS的功能 A domain (core consensus) ORC Transcription factor ABF1 enhances initiation-促使解链 B domains imperfect consensus B2-解链区 B1 B3 多细胞真核生物DNA的复制 真核生物复制起始点与ORC 酵母的复制起始点有一个专门的称呼，即ARS(自主复制顺序)。酵母的ARS含有11 bp的保守顺序：ACS (ARS consensus sequence) 。 人类基因组中，据估计大约有30,000 – 50,000复制起始点，但其序列的组成没有明显的规律。 真核生物复制起始点序列缺少一致顺序，但与复制起始点结合的ORC（origin recognition complex，复制起始点识别复合物）有很强的保守性。ORC由6个亚基蛋白组成：ORC1-ORC6，ORC1具有ATPase活性。ORC5可稳定ORC复合物的完整性，ORC6维持pre-RC的结合状态。ORC在细胞的整个周期都始终与复制起始点结合，仅在细胞分裂的中期短暂离开。 多细胞生物复制起始点 a) 多细胞真核生物缺少一致性的DNA复制起始点保守顺序, 图中显示的 为已报道的有关复制起始点位置; b) 细胞中有许多潜在的DNA复制起始 点位置, 它们可在不同的时间或状态下差别起始DNA复制。 人类主要的DNA聚合酶 前复制复合物组装 真核生物DNA前复制复 合物（pre- RC）组装 复制资格因子Cdc6和 CDT1在G1期开始合成， 前S期Cdc6和CDT1， MCM六聚体与ORC结 合，完成前复制复合物 组装。随后，在S期专 一性依赖细胞周期蛋白 激酶CDK 和DDK激酶 作用下，进一步结合 GINS，CDC45，SLD3 ，SLD2和DPBII，同时 DNA聚合酶Polδ和Polε与 复合物结合，完成前复 制起始复合物组装。 复制叉的组成及功能 真核复制叉是一个多组分的复合 物，含有解旋酶（helicase）和 DNA合成的活性。解旋酶在复 制叉前面将双链DNA解开产生一 段单链DNA的区段。活性解旋酶 作为整体含三个组分，MCM2-7， Cdc45和GINS。RPA为单链结 合蛋白，防止解开的单链复性。 复制叉还有行使功能必须的复制 叉保护成分（fork protection complex，FPC）：Timeless (TIM), Tipin , MRC1和And1。 MRC1将前导链DNA聚合酶Polε 与解旋酶连接，And1则将后随链 引物酶和DNA聚合酶Polδ与解旋 酶连接。 复制时复制叉上会同时发生两个事件： DNA母链解链和互补新链合成。图示为 酵母复制叉。Polε负责先导链复制， Polδ 负责后随链复制。 PLoS Genet 7(12): e1002407，2011 DNA夹板的安装 DNA夹板是一个称之为滑行夹板的蛋白质骨架，在DNA复制时具有促进加工能力的作用。在滑行模板存在的情况下，DNA聚合酶每次与模板的结合都可使掺入新链的核苷酸数目极大的增加，比缺少夹板的对照合成速率提高1000倍。在真核生物中，DNA夹板为PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen，细胞增殖核抗原)。PCNA的安装必须依靠夹板装载因子RFC（replication factor C）。RFC又称夹板装载因子（clamp loader），将PCNA安装在已经解旋的DNA单链上。RFC是一个关键的成分，可阻止聚合酶脱离DNA模板。安装好PCNA之后，RFC脱离DNA，随后PCNA与DNA聚合酶结合。 滑行夹板安装因子RFC 后随链滑行夹板安装：RFC是一个复合物，由5个含ATPase活性的 亚基组成（Rfc1-5）。RFC可在引物位置结合， 利用水解ATP释放 的能量使环状6聚