蛋白质分离技术层析2.pptVIP

亲 和 层 析Affinity Chromatography（AC）?;一、原理;酶： 基质类似物，抑制剂，辅酶 抗体： 抗原，病毒，细胞 DNA： 互补DNA或RNA，组蛋白，核酸聚合酶， 结合 蛋白 激素或药物：受体，载体蛋白 细胞： 细胞表面特异蛋白，外源凝集素 凝集素： 多糖，糖蛋白，细胞表面受体，细胞 ;Some definitions in affinity chromatography;;固相化——将配体以共价键连接于载体上制成亲和吸附剂;二、亲和层析分离过程;; ;（2）特异性洗脱法： 一种是选择与配体有亲和力的物质进行洗脱： 竞争对配体的结合，这种物质与配体的亲和力强或浓度较大，配体就会基本被这种物质占据，待分离物质被取代并洗脱。 例如：用单糖洗脱与凝集素结合的糖蛋白 另一种是选择与待分离物质有亲和力的物质进行洗脱：; 已使用过和柱，经过再生处理，去除非特异吸附的杂质后，可重复使用。 再生步骤： 起始缓冲液重复平衡一次 用高离子强度和低离子强度溶液处理 用弱酸或弱碱溶液处理;三 载体（基质）的选择;2、常用载体 一般纤维素以及交联葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺、多孔玻