第六章(2)-中药指纹图谱.pptVIP

* GC HPCE 气相色谱 Gas Chromatography (GC) ●分离效能高 ●分析速度快 ●适用于植物的挥发油成分及其它易挥发性成分或可转化为可挥发的成分测定 ●可提供保留值信息，与质谱联用，还可提供更丰富的化学结构信息 分辨率高，得到的色谱组份非常复杂，尤其是含挥发油药材，单萜类成分组成很不稳定，样品间差异可能很大，处理数据和判别相似度时一定程度的取舍 毛细管电泳 Capillary Electrophoresis ●分离效能高 ●分析速度快 ●高分辨率 ●可与紫外、荧光、电化学、质谱、拉曼光谱等联用，可提供更丰富的化学结构信息 * * 肉桂油的气相色谱指纹图谱 * * * * * * 独活GC指纹图谱 羌活GC指纹图谱 * * HPCE指纹图谱 高效液相色谱 红外光谱 (IR) Infrared Spectra ●几乎所有的物质都有特征的红外光谱。 ●虽然植物中药提取物还是一个混合物，但是由于不同物质的红外光谱具有加合性，因此，植物中药提取物的红外光谱能反映出所有成分的综合信息因而具有全息光谱的特点。 操作简便（不需要复杂的提取仪器）、快速、准确、经济、溶剂低毒、重复性高、实用性强。 * * 红外光谱图 中国药典规定：小蓟在开花时采。 根据1384cm-1处吸收峰的有无，可以鉴别其采集时间是否正确。 小蓟丁酮提取物的红外指纹图谱 * * 三、指纹图谱构建程序 中药指纹图谱 供试品溶液 10批以上中药 图谱信息 固定产地、采收期和加工炮制的中药 中药未知检品 预处理 不同产地、采收期和加工炮制的中药 评价标准 药效学试验 代表性 均一性 选择测试条件 方法建立考察 测定图谱参数 图谱分析 相关性 图谱评价 图谱测试、相似度评价 方法检验 * * （一）、样品收集 最关键的步骤 真实性 代表性 10批以上 原药材 ：不同产地、不同采收季节等 * * （二）、供试品溶液制备 原则 1. 确保主要化学成分或有效成分在图谱中得以体现 2. 根据所含成分的理化性质和检测方法 * * 原药材、饮片供试品溶液的制备 尽可能与生产工艺的提取溶剂接近或一致，定量操作 半成品/中间体供试品溶液的制备 参考制剂和产品制备工艺 中药制剂供试品溶液的制备 直接使用、稀释或溶剂提取的方式 * * （三）对照品（参照物）溶液制备 1. 参照物的选择 道地药材/饮片 半成品 制剂 主要活性成分或指标成分 内标物 2. 合适溶剂 * * （四）、指纹图谱实验研究 原则： 专属性、整体性、重现性 试验方法 试验条件 * * ? 液相色谱 ● 色谱柱：比较试验加以选择 * * 流动相 1 流动相 2 流动相 3 流动相：至少用三种不同组成比较 * * 适宜的柱温和检测波长 15 20 25 30 35 203 210 236 254 365 * * （五）、方法学验证 1. 稳定性试验 供试品溶液的稳定性 * * 川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果（n=5） S1 S2 S3 S4 S5 对照指纹图谱 S1 1.000 0.997 0.995 0.995 0.997 0.998 S2 0.997 1.000 0.998 0.997 0.996 0.999 S3 0.995 0.998 1.000 0.998 0.991 0.999 S4 0.995 0.997 0.998 1.000 0.990 0.999 S5 0.997 0.996 0.991 0.990 1.000 0.994 对照指纹图谱 0.998 0.999 0.999 0.999 0.994 1.000 * * 2. 重复性试验 实验方法的重复性 n=5 峰面积比值 RSD 不大于3％ 保留时间：平均相对保留时间±1min ± ± * * 注意事项 HPLC和GC指纹图谱：记录时间一般为1小时； TLC指纹图谱：须提供从原点至溶剂前沿的图谱； 光谱方法制定指纹图谱：必须按各种光谱的相应规定提供全谱。 对于化学成分类型复杂品种，必要时可建立多张指纹图谱。 * * (六)、指纹图谱分析步骤 标定共有指纹峰，确定参照峰 非共有峰总面积不得大于总峰面积的10％ 计算各共有峰的相对保留时间、峰面积比 给出标准（对照）指纹图谱及数据 * * (七)、指纹图谱的评价 要求“准确的辨认”而不是“精密的测量”； 比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求“相似”而不是“相同”。 评价色谱比较的结果，是根据其模糊属性，着