日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞的分离.pdf

中国热带医学2013年第13卷第8期ChinaTropicalMedicineAugust2013Vol.13No.8 ·915· 实验研究 ·论 著· 日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞的分离 赛雪，何兴，潘卫庆 * 摘要：目的 探索稳定、高效的血吸虫感染小鼠肝星状细胞的分离方法。 方法 采用Ⅳ型胶原酶体外灌注、 11.5% Optiprep、CD11b磁珠阴性分选方法相结合分离血吸虫感染小鼠肝星状密度梯度离心 。细胞结果 11.5% 6 Optiprep 密度梯度离心后细胞得率可达到（7.66±2.43）×10个/鼠，存活率为96%~98%。CD11b磁珠阴性分选后肝 6 星状细胞得率可达到（3.9±1.33）×10个/鼠，CD11b、F4/80双阴性细胞纯度为90.8%~95.8%。 结论 本实验建立 的血吸虫感染小鼠肝星状细胞分离方法稳定、高效，能够有效去除kupffer细胞的污染，为进一步研究HSC在血吸虫 病肝纤维化中的功能提供基础。 关键词：肝星状细胞；分离；密度梯度离心；CD11b磁珠 中图分类号：R532.21文献标识码：A 文章编号：1009-9727（2013）8-915-04 Schistosoma japonicum. * Wei-qing. （Department of Pathogen and Biology ，the Second Military Medical University ，Shanghai 200433 ，P. R. China ； Corresponding author: PAN Wei-qing,E-mail: wqpan0912@） Abstract：Objective infectedwithSchistosomajaponicum.Methods 6 CD11bmagneticmicrobeads.Results ±2.43）×10 cellspermice，theviabilityofthecellswere96%～ 6 ofHSCwas（3.9±1.33）×10 Conclusions Keywords： 肝星状细胞（Hepatic stellate cells，HSCs）又称储 脂细胞（1ipocyt），Ito细胞或窦周细胞（perisinusoidall cell），分布于肝组织窦周间隙，是肝脏中的一种间质司），小鼠抗大鼠CD11b抗体磁珠、LD分选柱（购自 [1] 细胞 。在各种肝纤维化动物模型和人类肝纤维化疾 病中，HSCs是主要的效应细胞，HSCs的激活是肝纤 、倒置荧光显微镜 [2] 维化的关键步骤 。分离肝星状细胞是肝纤维化研究 （Nikon Eclipse、VarioMACS分选器E400）、电子分析 的基础工作之一，目前常采用Ⅳ型胶原酶体外灌注、 天平、超净工作台、低温离心机、倒置相差显微镜等。 密度梯度离心法分离肝星状细胞