第五节 速度影响因素.ppt

(一）可逆抑制作用 某些抑制剂结合在酶活性中心以外的部位，因而与底物和酶的结合无竞争，即底物与酶结合后还能与抑制剂结合，同样抑制剂与酶结合后还能与底物结合。但酶分子上有了抑制剂后其催化功能基团的性质发生改变，从而降低了酶活性。这种作用称为非竞争性抑制作用。 2. 非竞争性抑制作用 E＋S ES E＋P ＋ Ｉ EI ＋ Ｉ ESI ＋S (一）可逆抑制作用 2. 非竞争性抑制作用 非竞争性抑制中， Vmax变小， Km不变 这种抑制作用不能用增加底物浓度的方法来消除 V = Vmax ·[ S ] (Km+ [ S ])( 1+[I]/Ki) (一）可逆抑制作用 2. 非竞争性抑制作用 (一）可逆抑制作用 2. 非竞争性抑制作用 例如： 金属络合剂如EDTA、F -、CN -、N3- 等可以与络合金属酶中的金属离子，从而抑制酶的活性。 (一）可逆抑制作用 3. 反竞争性抑制作用 某些抑制剂不能与游离的酶结合，而只能在酶与底物结合成复合物后再与酶结合。当酶分子上有了抑制剂后其催化功能被削弱。这种作用称为反竞争性抑制作用。 (一）可逆抑制作用 3. 反竞争性抑制作用 (一）可逆抑制作用 (二）不可逆抑制作用 抑制剂以共价键不可逆地与酶相结合而抑制酶的活性。这种抑制作用叫不可逆抑制作用。 不可逆抑制剂不能用透析或超滤等方法去除。 (二）不可逆抑制作用 常见的不可逆抑制剂： 碘乙酸（ICH2COOH） 是一种烷化剂，可使巯基烷化： E-SH + I-CH2COOH → E-S-CH2COOH + HI 所以它是巯基酶的抑制剂。 如抑制3-磷酸甘油醛脱氢酶、脲酶、a-淀粉酶等? (二）不可逆抑制作用 有机磷化合物 可使-OH磷酯化，所以它是活性中心有Ser残基的酶的抑制剂。 常见的有机磷农药，如敌敌畏、敌百虫，它们杀灭昆虫的机理就在于可抑制乙酰胆碱酯酶的活性，该酶的作用是将神经递质乙酰胆碱水解。 若它被抑制，会导致乙酰胆碱的积累，使神经过度兴奋，引起昆虫的神经系统功能失调而中毒致死。 常见的不可逆抑制剂： 第五节 影响酶反应速度 的因素 一.底物浓度的影响 (一) 酶反应速度与底物浓度的关系曲线 对于简单的酶反应，当酶浓度和其他条件恒定时： v [S] 0 Vmax 零级反应 一级反应 混合级反应 该曲线可以用米氏方程 来描述 (二) 米氏方程 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] (二) 米氏方程 对于单底物、单产物反应，其反应过程需经过中间复合物ES，即 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] 1. 米氏方程的推导 E＋S K1 K-1 ES K2 K-2 E＋P Michaelis-Menten的三个假设： (1)推导的v为反应初速度 → 产物的生成量很少 → k-2的反应忽略不计。即 E＋S K1 K-1 ES K2 E＋P (二) 米氏方程 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] 1. 米氏方程的推导 Michaelis-Menten的三个假设： (2)反应体系处于稳态 即[ES]不变 → ES的生成量 = ES的分解量。即 k1[E][S]=k-1[ES]+k2[ES]=(k-1+k2)[ES] 设 Km=(k-1+k2)/k1 → [E][S]=Km[ES] → [S] [ES] → [S]0=[S]+[ES]≈[S] 则 [E][S]0=Km[ES] (3)[S] [E] [E]0= [E]+ [ES] (二) 米氏方程 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] 1. 米氏方程的推导 Michaelis-Menten的三个假设： (2)反应体系处于稳态 (3)[S] [E] Vmax=k2[E]0 ， (1)推导的v为反应初速度 解此二元一次方程，得 [ES]= [E]0· [S] Km＋[S] v = k2[ES] 则 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] (二) 米氏方程 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] 2. 米氏方程的讨论 (1)当[S]→∞时， Km+[S]≈[S]，∴ v≈Vmax ∴ 为零级反应 (2)当[S]→0时， Km+[S]≈Km，∴ v≈Vmax/Km·[S] ∴ 为一级反应 (3)米氏方程的曲线 为双曲线 有两条渐近线： 当[S]→∞时，逼向渐近线 v=Vmax 当[S]“→”-Km时，逼向渐近线 [S]= - Km (二) 米氏方程 3. 米氏方程中常数的意义 (1)Vmax—— 最大反应速度 由于 Vmax= k2[E]