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实时荧光定量PCR;;;;Real-time RT-PCR技术： 利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析;如何检测荧光强度呢? 我们先来了解一下荧光探针。; 提到荧光探针或者荧光引物，有一个基础概念我们需要首先明确，那就是荧光共振能量转移( FRET)：一对合适的荧光物质可以构成一个能量供体和能量受体对, 其中供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠，当它们在空间上相互接近到一定距离(1—10 nm)时，激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收，使得供体发射的荧光强度衰减，受体荧光分子的荧光强度增强。所以我们就检测不到它的荧光。;TaqMan---水解型探针;在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶以引物为起点沿模板5′→3′方向延伸，合成一条新的DNA互补链。每扩增一条DNA分子，释放一个荧光信号，可以在循环过程中检测荧光.;SYBR Green I 工作原理;结合的SYBR Green I;那我们如何对起始模板进行定量呢？;1、扩增曲线;2、荧光阈值;3、CT值;;理想的PCR反应： X=X0*2n 非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)n n：扩增反应的循环次数 X：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率;定量原理;Real-time PCR应用