如何使用Identiler试剂盒和毛细管电泳平台来鉴定人类细胞系.PDFVIP

应用指南 Identifiler试剂盒和SeqStudio基因分析仪 如何使用Identifiler试剂盒和毛细管电泳平台 来鉴定人类细胞系 本应用说明包含如下内容： 鉴定细胞系的真实性或来源通常要分析几个基因座的突变 • Applied Biosystems™ Identifiler™ Plus和Direct试剂盒可 或位点是否匹配预期的等位基因。目前几种分析变异位点 用来鉴定体外生长的细胞系类型 的方法-如通过分析限制性片段长度多态性(RFLPs)和扩 增片段长度多态性(A FLPs)进行同工酶变异的电泳分析， • 只需使用低至100 μg纯化基因组DNA (gDNA)即可鉴定细 胞系 以及新一代测序(NGS)和MALDI-TOF质谱法-都存在各自 的缺点，如集成性不足、成本高等。标记高度可变的ST R • 将细胞直接点样在Applied Biosystems™ NUCLEIC-CARD™ (ST R)可作为简便、价廉且高度特异性的细胞系识别 “指 样品采集装置上可鉴定细胞系 纹”，是DNA法医学分析常用的技术。将这些高度变异基 • 新型Applied Biosystem™ SeqStudio™基因分析仪在更低 因座的等位基因谱与已知的细胞系标准化样品的基因谱进 的基因组DNA和细胞浓度时，相较Applied Biosystems™ 行比较，即可鉴定细胞系的真实性。诸如ATCC和莱布尼茨 3130和3500基因分析仪，性能更出色。 DSMZ-德国微生物和细胞培养物保藏中心(Leibniz-Institute DSMZ—German Collection of Microorganisms and Cell 引言 Cultures)等组织提供在线访问可搜索的数据库，以便研究 人类疾病研究十分依赖培养物中的体外人类细胞系分析。 人员查询已知的细胞类型。另外，研究人员可以建立实验 然而，一个日益突出的问题却是，体外培养的细胞可能会 室独特的细胞系的等位基因图谱，将细胞的等位基因图谱 出现识别错误或被其他细胞系污染[1] 。细胞系识别错误会 与自己的内部标准进行比较，以确认细胞系类型。 产生误导性的结果、困惑并增加研究成本[2-4] 。众多期刊 和资助机构目前都要求研究人员保证所用细胞系真实可靠 并确定贯穿整个研究过程的维持策略(例如，Yu et al., 2015 [5]和Neimark, 2015 [6]) 。 通常情况下，使用毛细管电泳对具有不同重复数目的微 Biosystems™ GeneMapper™的GeneMapper™ 5软件可 卫星基因座扩增的片段进行ST R分析。我们已经建立起 通过预设的等位基因分子量标准和筛选试剂盒覆盖的各种 毛细管电泳的金标准体系，开发出适合研究人员需求的 STR等位基因的大小进行STR分析。图1显示了完整的细胞 高灵敏度、高通量仪器。此外，A pplied Biosystems™产 系鉴定工作流程图。 品线还为使用毛细管电泳仪器进行基于PC R的ST R指纹 识别，提供了几款试剂盒。其中，A pplied Biosystems™ 我们最近推出了毛细管电泳仪器系列的新成员SeqStudio Ident if iler™ Plus PC R扩增试剂盒经过专门优化，能够 基因分析仪，新增了多项可简化毛细管电泳分析的功能。 从多种浓度的纯化g DNA 制剂分析16种高度变异的人类