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遗传学实验 山东大学 生命科学学院 13 级临八 人类 X 染色质的制备与观察 摘要：人类X 染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X 染色体在间期细胞 核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。 根据X 染色体失活与Lyon 假说，雌性哺乳动物的两条X 染色体中，只有一条X 染色体有转 录活性，另一条X 染色体无转录活性，呈固缩状，形成X 染色质。失活发生在胚胎发育早 期，且失活是随机的。本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X 染色质 标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。本次试验的目的是掌握鉴定人类X 染色 质的方法，在显微镜下正确识别X 染色质，即Barr 小体的形态特征及所在部位，了解X 染 色体失活的有关假说以及为失活X 染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。 1.引言 1.1 巴氏小体 人类有23 对染色体，其中22 对为常染色体，另一对为性染色体。女性为XX，男性为 XY。X 与Y 染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。Y 染色体含有很少的基因，而X 染色体则含有大量的基因。男性与女性的常染色体数目是一样 的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X 染色体，而男性一条X 一条Y，因此女 性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男 性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。 剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在 XY 性别决定机制的生物 中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。也就是说，在 雌性和雄性细胞里，由X 染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相 等。剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条 X 染色体异染色质化(失活)，只有一条 X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X 染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是 X 染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X 染色体都有活性，但它们的转录速率低 于雄性细胞X 染色体的转录速率。 1949 年M.L.Barr 等研究发现雌猫神经元细胞核膜内有凝缩的深染小体，而雄性个体细 胞中则没有，这一结构被称为巴氏小体(Barr body)。进一步研究发现：所有哺乳类雌体细 胞中都可以见到这一结构。巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中X 染色质随机失活形成的， 在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化) ，浓缩、染色深、无活性,贴近于核膜边 缘的染色小体。细胞分裂期可形成正常的染色体形态；复制时间比有活性的X 染色体稍迟一 些。 1.2 莱昂假说(Lyon hypothesis) 1961年,Mary Lyon提出了阐明哺乳动物剂量补偿效应和形成巴氏小体的X染色体失活的假 说。假说的主要内容包括： ①乳动物雌性个体两条X 染色体的其中一条在受精后失活。 ②两条X 染色体中哪一条失活是随机的；在同一哺乳动物的体细胞中，有些父源X 染色体失 活,有些为母源失活。 ③失活在胚胎早期发生(人类在胚胎发育16 天时)，某一个细胞的X 染色体一旦失活，这个 细胞的所有后代细胞中该X 染色体均处于失活状态。当生殖细胞形成时,失活的染色体可恢 复。 ④杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体，即某些细胞中来自父方的伴性基因表达，某些 细胞中来自母方的伴性基因表达，这两种细胞随机镶嵌存在。 1 遗传学实验 山东大学 生命科学学院 13 级临八 虽然大量的证据表明了莱昂假设的正确性，但仍存在一些问题。比如既然女人只有一 条X 染色体是有活性的，那么XXX 和XO 的女性也只有一条X 染色体有活性，那么为什么会 出现异常呢？ 近年来研究发现：X 染色体为局部失活，部分基因不同程度表达；X 染色体失活并非随 机失活；在生殖细胞发生中，失活X 染色体回复活性。X 染色体失活始于胚胎发育早期，在 X 染色体长臂靠近着丝点的一段序列控制X 染色体的失活，称为X 染色体失活中心（XIC）。 X 失活中心Xic (X-inactivation center,)是一个顺式作用位点,包含辨别X 染色体数目的信 息和Xist 基因。Xic 长约1