病原生物学与免疫学实验指导.doc

病原生物学与免疫学实验指导 病原生物学与免疫学实验目的及实验室规则 一、实验目的 病原生物学与免疫学实验是本课程的重要组成部分。通过实验，验证有关理论，加深对病原生物学与免疫学基本理论知识的理解。通过实验操作或示教，使学生掌握常见病原生物的形态、分离培养和鉴定方法；熟悉免疫系统的组成、免疫学试验的方法及常见生物制品的应用；学会常用的消毒、灭菌方法与无菌技术，建立无菌观念；通过正确地观察和分析实验结果，培养学生实事求是的科学态度、严肃认真的工作作风及分析问题和解决问题的能力。 二、实验室规则 1. 进入实验室必须穿工作衣，戴工作帽，离开实验室时脱下、反折并放在指定处。工作服应经常清洗、消毒，保持洁净。 2. 非实验物品不准带入实验室，必需的学习用具带入后要远离操作台。 3. 实验室内严禁饮食、吸烟或用嘴舐铅笔、湿润标签等，不要用手触摸头面部及身体暴露部位，以防感染。 4. 实验室内应保持肃静，禁止高声谈笑或随便走动，以利集中精力进行实验操作。 5. 实验室内任何物品不得携出室外，使用过的实验物品，如培养物、带菌材料、实验动物及器皿等需按要求处理，不得随便乱扔或用水冲洗。 6. 实验过程中一旦发生意外，如细菌污染实验台、地面、手或衣服时，应立即报告指导老师，以便及时处理。 7. 爱护公物、节约实验材料，如损坏实验器材，应报告指导老师，并进行登记，酌情处理。 8. 实验完毕，应整理实验物品、清理实验台面，打扫实验室卫生。离室前需用消毒液泡手，再以清水冲洗，脱去工作衣、帽，放入指定地方，关好水、电、门、窗后方可开实验室。 第一部分 免疫学基础实验 实验一 免疫系统、补体系统 【实验目的】 1. 学会观察中枢免疫器官。 2. 学会观察淋巴结的结构。 3. 学会在显微镜下观察吞噬细胞的吞噬现象。 4. 学会观察E花环试验、淋巴细胞转化试验结果 5. 初步学会补体溶血试验。 【实验材料】 1. 胎儿胸腺、雏鸡腔上囊标本。 2. 淋巴结组织切片、吞噬细胞吞噬现象、E花环形成试验、T细胞亚群测定及淋巴细胞转化试验结果示教片。 3. 试管架、小试管、1ml刻度吸管、待测血清、2%绵羊红细胞、溶血素(3个单位)、生理盐水、记号笔、水浴箱等。 【实验内容与方法】 （一） 胎儿胸腺、雏鸡腔上囊标本的观察(示教) 1. 观察胎儿的胸腺标本 观察4～6个月以上胎儿的胸腺标本，胸腺位于胸腔纵隔上部，胸骨后方，由左右不对称两叶组成。 2. 观察雏鸡腔上囊标本 腔上囊位于雏鸡泄殖腔后上方，为一囊状淋巴组织。 （二）镜下观察淋巴结组织切片标本(示教) 先用低倍镜观察淋巴结的组织学结构。注意淋巴结的被膜、皮质(浅皮质、深皮质)和髓质(髓索、髓窦)；再用高倍镜观察淋巴组织内的淋巴细胞、巨噬细胞等。并注意观察分布在深皮质内的高内皮细胞小静脉 (毛细血管后微静脉，内皮细胞为单层立方上皮细胞)，此为淋巴细胞再循环的重要途径。 （三）观察吞噬细胞的吞噬现象(示教) 应用光学显微镜油镜观察中性粒细胞内被吞噬的细菌及巨噬细胞吞噬鸡红细胞的染色标本片。鸡红细胞的形态为椭圆形、有细胞核。在巨噬细胞内因鸡红细胞被消化的程度不同，其大小不一。 （四）T淋巴细胞及功能检测(示教) 1. E玫瑰花结试验结果观察 T淋巴细胞表面有CD2分子(即绵羊红细胞受体)。在一定条件下，能与绵羊红细胞(SRBC) 结合形成玫瑰花状的细胞团，称E玫瑰花结试验。淋巴细胞周围结合3个以上绵羊红细胞即为E花结形成细胞。吸附绵羊红细胞的淋巴细胞为T淋巴细胞。本试验一般用于检测病人的T细胞数量，主要对细胞缺损疾病的诊断和疗效观察，以及对恶性肿瘤的疗效观察和预后判断有一定意义。 2. 淋巴细胞转化试验结果观察 T淋巴细胞表面有植物血凝素(PHA)受体，如淋巴细胞在体外培养过程中受到PHA的刺激后被激活，T淋巴细胞的形态和代谢会发生一系列变化，转化为淋巴母细胞。依据细胞转化程度测定T细胞的免疫功能称为淋巴细胞转化试验。淋巴母细胞的特征为：①细胞体积增大。②核质疏松，核仁增多。③胞浆丰富，空泡增多。用高倍镜或油镜观察200个淋巴细胞，计数其中转化细胞数，可计算出淋巴细胞转化百分率。转化率的高低可反映T淋巴细胞的功能。正常参考值：60.1±7.6%。 （五）补体溶血试验(操作) 1. 实验原理 抗原(绵羊红细胞)与相应抗体(溶血素)特异性结合，形成抗原抗体复合物，可通过经典途径激活补体系统，使绵羊红细胞溶解。 2. 步骤与方法，包括： （1）取洁净小试管4支，依次编号后置于试管架上。 （2）取1ml刻度吸管4支，按表-1分别加入各成分，摇匀。注意吸管不能混用。 （3）置37℃水浴箱中水浴30min 表-1 补体溶血试验操作表 试 管 编 号 1 2 3 4 补体(C) 溶血素(A) 生理盐水(N