实验5细菌的单染色和革兰氏染色.pptVIP

;实验五 细菌的单染色和革兰氏染色 ;目 的 要 求;实 验 原 理; ;实 验 材 料;实 验 程 序;1. 洗净载玻片：先将载玻片洗净，擦干。 2. 涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水(生理盐水)，按无菌操作法取样品菌涂片，做成菌悬液。（讨论：取菌多少对结果的影响？） 3. 晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 4. 固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。 （讨论：固定的目的？） ;5. 染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。 6. 水洗：用水洗去涂片上的染色液。 7. 干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （讨论：干燥的目的？） 8. 镜检：先低倍观察，再高倍观察，最后用油镜。 ;1. 涂片-干燥- 固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 ;4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒左右，后立即用流水冲洗 5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。;1.涂片不可太厚，会造成假阳性。 2.固定时不能在火上烤的时间太长，否则菌体收缩变形。 3.染色后必须晾干后才能用油镜镜检 。 4.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。 5. 菌龄也有影响。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 ;1.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 2.涂片用的玻璃片为什么不得有油污？为什么涂片要求菌膜要均匀、薄？ 3.革兰氏染色的原理、依据是什么？