蛋白质昭化-公开课件（讲义）.pptVIP

第三章 蛋白质化学 催化和调节功能：酶、激素 结构功能 防御功能 ：抗体 运输功能 运动功能 第一节、蛋白质的化学组成与分类 蛋白质的基本结构单位：氨基酸（amino acids，AA） 一、氨基酸的结构与分类 1、结构（20种基本氨基酸） α—氨基酸：19种 α—亚氨基酸：1种 要求：掌握20种AA的三字母代号 20种AA的结构特征 氨基酸的结构通式: 赖氨酸 精氨酸 组氨酸 分别含 氨基 胍基 咪唑基可质子化带正电荷 （2）根据侧链R基团的酸碱性，可 分为: 中性氨基酸:一氨基一羧基氨基酸 酸性氨基酸: Asp、Glu 碱性氨基酸: His、Lys、Arg 蛋白质中的氨基酸修饰 4-羟脯氨酸 二、氨基酸的重要理化性质 （一）一般物理性质 1、AA的吸收光谱 Trp、Tyr、Phe能吸收紫外光 λ=280nm 2、旋光性（ Gly无旋光性） 2、氨基酸等电点（isoelectric point）的概念： 当溶液浓度为某一pH时,氨基酸分子 主要以两性离子的形式存在,能够解离成 正离子和负离子的数目和趋势相等,即净 电荷为零,这一pH即为氨基酸的等电点, 简称pI。 氨基酸的酸碱滴定曲线 氨基酸等电点（ pI ）的计算 A、中性氨基酸，以Ala为例 B、酸性氨基酸，以Asp为例 C、碱性氨基酸，以Lys为例 与2，4-二硝基氟苯的反应 （Sanger反应） DNFB + AA（无色）→ DNP-AA（黄 色）+HF DNS-CL+ AA → DNS-AA（发荧光） （5-二甲氨基奈磺酰氯） 牛胰岛素的一级结构 （1953年Sanger等） 胰岛素是第一个被阐明化学结构的蛋白质。 牛胰岛素：由51个氨基酸组成；相对分子质量 5734。 两条肽链，一条A链，一条B链。 A链是由21个氨基酸组成的二十一肽。 B链是由30个氨基酸组的三十肽。 含三对二硫键，链间两对，A链内一对。 二、氨基酸顺序分析 蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要包括以下几个步骤： 1. 分离纯化蛋白质，得到一定量的蛋白质纯品。 2. 取一定量的样品进行完全水解，再用氨基酸自动分析仪，测定蛋白质的氨基酸组成。 3. 测定每条多肽链中氨基酸的组成（多肽链的水解） ① 酸水解： 6mol/L HCl 蛋白质————————〉L-AA混合物 真空的安瓿瓶100℃10-24hr 缺点：Trp被破坏，Gln和Asn转化成Glu和Asp。 ②碱水解： 4N Ba(OH)2 10hr 蛋白质——————〉D,L-AA混合物 缺点：含胍基、－S－、－OH的AA被破坏。 意义：测Trp（与酸法互补）。 ③ 酶水解 ： 多种酶 蛋白质——————〉肽段或L-AA 4.分析蛋白质的N-端和C-端氨基酸 N端分析方法 ①二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法） DNFB也可与肽或蛋白质反应 该法现主要用作蛋白质N-端的氨基数目测定，从而确定肽链数目 DNFB法分析N-端氨基酸残基 Edman降解法测定氨基酸序列 －HN－CH－CO－NH－CH－CO－ | | R1 R2 胰蛋白酶： R1 =Lys或Arg侧链 R2 =Pro抑制水解 -HN－CH－CO－NH－CH－CO- | | R1 R2 胰糜（凝乳）蛋白酶： R1 =Phe、Trp、Tyr R2 =Pro抑制水解 -HN－CH－CO－NH－CH－CO- | | R2 R3 嗜热菌蛋白酶：