实验8 微丝染色及形态观察教学讲义.pptVIP

微丝染色及形态观察 [目的要求] 1. 掌握微丝的染色方法。 2. 了解光镜下微丝的基本形态结构。 [实验原理] 真核细胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架(cell skeleton)，在维持细胞形状和运动方面具有重要作用。根据组成成分和组装结构的不同，可将细胞骨架分为微管(microtubule, MT)、微丝(microfilament, MF)和中间纤维(intermediate filament, IF)。微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。 当细胞用TritonX-100溶液处理，能够溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮蓝（非特异性蛋白质染料）染色后，胞质背景着色弱，微管等蛋白结构在光镜下无法分辨，在光镜下观察到主要是由微丝组成的应力纤维。 应力纤维由平行排列的微丝组成，体外培养的贴壁细胞应力纤维尤为发达，形态长而直，常与细胞长轴平行并贯穿细胞全长。 微丝在细胞内的分布特征 [实验用品] 器具：CO2恒温培养箱、倒置显微镜、超净工作台、低速离心机、普通光学显微镜、移液器、恒温箱、镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸。 材料：盖玻片培养的成纤维细胞 试剂：6 mmol/L PBS（pH 6.5）、1％Tri