实验一、蛋白质含量测定培训资料.pptVIP

生物化学与分子生物学基础实验 生物化学与分子生物学基础实验 实验一 几种蛋白质定量测定方法的比较 生物化学与分子生物学基础实验 1 掌握紫外吸收法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量的原理和方法 2 掌握分光光度计的原理和使用方法 实验目的 生物化学与分子生物学基础实验 ①有多少样品可供分析; ②蛋白质样品浓度大约是多少; ③样品中含有哪些可能影响定量的化学物质； ④所选方法是否简单、可靠； ⑤含量测定的专一性要求是否很高。 选择合适的蛋白质含量测定方法主要基于几点考虑： 生物化学与分子生物学基础实验 常用的方法 物理性质：紫外吸收法 化学性质：Folin－酚试剂法（Lowry法），BCA法（Bicinchoninic acid 法），凯氏定氮法，双缩脲法（Biuret法），胶体金测定法，等等 染色性质：考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、银染法 测定绝对含量应用凯氏定氮法（蛋白质的含氮量为16％）。 生物化学与分子生物学基础实验 图1.蛋白质和核酸的紫外吸收光谱 图A是15μg /ml蛋白的吸收光谱。图A中插图是1mg/ml的牛免疫球蛋白IgG(I)、牛血清白蛋白(B)和白明胶(G)的吸收光谱，缓冲液为：0.01% Brij35,0.1M K2SO4,5mM KH2PO4,pH7。 图