基因工程第四章目的基因的分离与修饰.ppt

转座子载体构建 ↓转化植物（T1，杂合子)收获T2种子 ↓筛选T2，获突变体 ↓提取其DNA,建立基因组文库 ↓以转座子为探针，筛选突变体文库 ↓ PCR技术克隆转座子两侧的DNA序列 ↓利用侧翼DNA序列作探针从野生型植物的基因组文库中钓取基因 ↓基因功能的验证 转座子标签法克隆基因 3.2.5 酵母双杂合系统 ---利用生物大分子之间的互作分离基因 转录激活因子参与真核生物的基因转录。 AD BD 许多真核生物的转录激活因子都是由两个结构上可以分开的、功能上相互独立的结构域组成. 酵母双杂交法原理: 利用酿酒酵母的GAL4蛋白质N-端和C-端分别融合的两种蛋白质相互作用可激活具有UAS（upstream activating sequence，上游激活序列）报告基因表达筛选目的基因的方法。 i.?? GAL4蛋白质是一个调控基因，控制半乳糖利用酶类基因的表达，这些基因的5’-端存在UAS序列； ii.??GAL4存在两个结构域：N-端(1-147)具有UAS-DNA结合域(DNA-binding domain, BD), C-端(768-881)具有转录激活结构域(transcriptional activation domain, AD)。这两个结构域可以单独起作用。 AD BD iii.?如果AD