微生物与基因工程教学幻灯片.ppt

3. Tag DNA聚合酶：是一种耐热的依赖于DNA的DNA聚合酶，具有5’→ 3’聚合酶活性，该酶最适反应温度为75~80 ℃，主要用途是进行PCR反应。 4. 逆转录酶（依赖于RNA的DNA聚合酶）主要作用是将mRNA反转录成cDNA （二）碱性磷酸酶 其作用是去除DNA、RNA的5’磷酸根（ 5’-P），以防自身环化；另外在用32P标记5’末端前，可先用其去除DNA或RNA上的5’- P （三）核酸酶 S1核酸酶：主要用于去除DNA片段粘末端而产生平端；打开cDNA中发夹结构，使其成平端。 核糖核酸酶（RNaseA)：在质粒提取时降解RNA；从DNA-RNA杂交体中去除未杂交的RNA区。 第五节 外源基因导入宿主细胞 二、克隆载体对宿主的要求 一、宿主的基本要求与性质 　　1、能够高效吸收外源DNA； 　　2、根据载体的类型和标记选择合适宿主，例： M13 噬菌体载体，选择含有F因子雄性大肠杆菌； λ噬菌体载体，选择E.coliK12。 　　3、不具有限制修饰系统，故不会使导入宿主细胞内未经修饰的外源DNA发生降解； 　　4、一般为重组缺陷型（RecA-）菌株，使克隆载体DNA与宿主染色体DNA之间不发生同源重组； 5、安全：需严格限制载体的宿主范围，以达到尽量避免重组体从实验室逃逸出去。 1、外源DNA导入导入原核细胞 （1）转化和转染：外源D